Mine otse sisu juurde
MDCK (NBL-2)
Kude
Neerud
Sünonüümid
MDCK, NBL-2, Madin-Darby Canine Kidney, Madin Darby Canine Kidney

Dokumendid

MDCK (NBL-2)

Cell line · Toote number 602280

MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) cells serve as a pivotal vitro model in pharmaceutical sciences, particularly in the study of epithelial transport, epith...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) rakud on farmaatsiateadustes oluline vitro mudel, eriti epiteeli transpordi ja epiteeli läbilaskvuse uurimisel ning membraani läbilaskvuse hindamise vahendina. Need rakud, mis on algselt saadud koera neeru tubulirakkudest, omavad enterotsüütidega sarnaseid omadusi, mis teeb neist suurepärase imendumise sõeluuringu mudeli ja usaldusväärse rakuliini ravimite transpordimehhanismide hindamiseks.

MDCK rakke kasutatakse hargnemismorfogeneesi uurimiseks, mis on elundite arengu ja rakkude diferentseerumise mõistmiseks ülioluline protsess. See võime kompleksseks organiseerumiseks rõhutab nende tähtsust epiteelkoe arhitektuuri ja rakkude akumulatsiooni uurimisel.

MDCK rakud on tuntud oma võime poolest moodustada tihedaid, polariseeritud epiteelikihte, mis muudab nad väärtuslikuks mudeliks epiteeli barjääri funktsiooni ja rakkude polaarsuse uurimiseks, mistõttu on nad asendamatu mudel ravimikandjate süsteemide ja membraani sisemise läbilaskvuse uurimiseks. Apikaalsete membraanide ja hästi määratletud rakuliidete olemasolu MDCK rakkude monokihis hõlbustab üksikasjalikke läbilaskvuse katseid, parandades meie arusaamist transepiteliaalsest sekretsioonist ning epiteelirakkudele omastest transpordi- ja ainevahetusfunktsioonidest.

Viroloogias on MDCK-rakud olulised inimese gripiviiruste, näiteks H3N2-tüve uurimiseks, sest nad ekspresseerivad nende viirustega ühilduvaid retseptoreid. Seetõttu on nad peamine ressurss viirusinfektsioonide keerukuse uurimiseks, uurides, kuidas epiteelirakud reageerivad viiruslikele väljakutsetele. Nende kasulikkus laieneb ka viirusevastaste ainete ja vaktsiinide hindamisele, mis rõhutab veelgi nende tähtsust nakkushaiguste uurimisel ja ravimiarenduses.

Kokkuvõttes on MDCK rakud hindamatu väärtusega farmaatsia- ja viroloogilistes uuringutes nende epiteeli omaduste, transpordiuuringute ja kasulikkuse tõttu viirusinfektsiooni mudelites, eriti gripiviiruste puhul, mis muudab nad asendamatuks meie arusaamade edendamisel ravimite manustamisest, epiteelibioloogiast ja nakkushaigustest.

Kude
Neerud
Sünonüümid
  • MDCK
  • NBL-2
  • Madin-Darby Canine Kidney
  • Madin Darby Canine Kidney

02Klassifikatsioon

Organism
Koer
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteel

04Tunnused

Viide
MDCK (NBL-2) (Cytioni katalooginumber 602280)
NCBI maksukood
9615
Cellosaurus
CVCL_0422

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirusele vastuvõtlikkus
Vesikulaarne stomatiit (Indiana), vaktsiinia, koksackiiviirus B5, reoviirus 2, 3, adenoviirus 4, 5, sigade vesikulaarne eksanteem, koerte nakkuslik hepatiit
Viirusresistentsus
Polioviirus 2, koksackieviirus B3, B4
Pöördtranskriptaas
Negatiivne
Tooted
Keratiin

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
Iga 3 päeva tagant
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
Cocker-spanjel
Doonori vanus
Täiskasvanud