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MDCK (NBL-2)
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MDCK, NBL-2, Madin-Darby Canine Kidney, Madin Darby Canine Kidney

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MDCK (NBL-2)

Cell line · Número do produto 602280

MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) cells serve as a pivotal vitro model in pharmaceutical sciences, particularly in the study of epithelial transport, epith...

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01Informações gerais

Descrição

As células MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) são um modelo vitro fundamental nas ciências farmacêuticas, nomeadamente no estudo do transporte epitelial, da permeabilidade epitelial e como ferramenta para a avaliação da permeabilidade das membranas. Estas células, originalmente derivadas de células tubulares renais de um canino, apresentam propriedades semelhantes às dos enterócitos, o que as torna um excelente modelo de rastreio da absorção e uma linha celular fiável para avaliar os mecanismos de transporte de medicamentos.

As células MDCK são utilizadas para explorar a morfogénese ramificada, um processo crucial para compreender o desenvolvimento dos órgãos e a diferenciação celular. Esta capacidade de organização complexa sublinha a sua importância no estudo da arquitetura do tecido epitelial e da acumulação celular.

As células MDCK são bem conhecidas pela sua capacidade de formar camadas epiteliais apertadas e polarizadas, o que as torna um modelo valioso para o estudo da função de barreira epitelial e da polaridade celular, tornando-as um modelo indispensável para sistemas de transporte de fármacos e para o estudo da permeabilidade intrínseca da membrana. A presença de membranas apicais e de junções celulares bem definidas nas monocamadas de células MDCK facilita experiências de permeabilidade pormenorizadas, melhorando a nossa compreensão da secreção transepitelial e das funções de transporte e metabólicas inerentes às células epiteliais.

Em virologia, as células MDCK são essenciais para o estudo dos vírus da gripe humana, como a estirpe H3N2, porque expressam receptores compatíveis com esses vírus. Isto torna-as um recurso fundamental para investigar os meandros das infecções virais, examinando a forma como as células epiteliais reagem aos desafios virais. A sua utilidade estende-se à avaliação de agentes antivirais e vacinas, realçando ainda mais a sua importância na investigação de doenças infecciosas e no desenvolvimento terapêutico.

Em resumo, as células MDCK têm um valor inestimável na investigação farmacêutica e virológica devido às suas caraterísticas epiteliais, estudos de transporte e utilidade em modelos de infeção viral, particularmente para os vírus da gripe, o que as torna indispensáveis para fazer avançar a nossa compreensão da administração de medicamentos, da biologia epitelial e das doenças infecciosas.

Tecido
Rim
Sinónimos
  • MDCK
  • NBL-2
  • Madin-Darby Canine Kidney
  • Madin Darby Canine Kidney

02Classificação

Organismo
Cão
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Epitelial

04Identificadores

Referência
MDCK (NBL-2) (número de catálogo Cytion 602280)
Número de identificação fiscal do NCBI
9615
Cellosaurus
CVCL_0422

05Expressão e suscetibilidade

Susceptibilidade ao vírus
Estomatite vesicular (Indiana), vaccinia, coxsackievirus B5, reovirus 2, 3, adenovirus 4, 5, exantema vesicular do suíno, hepatite infecciosa canina
Resistência aos vírus
Poliovírus 2, coxsackievírus B3, B4
Transcriptase reversa
Negativo
Produtos
Queratina

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
A cada 3 dias
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
Cocker Spaniel
Idade do dador
Adulto