Siirry sisältöön
GIMEN-kennot
Kudos
Aivot
Sairaus
Neuroblastooma
Metastaasikohde
Luuydin
Synonyymit
Gi-ME-N, Gi-MEN, GI-ME-N, Gimen, Gimen1, Gaslini Institute-ME-Neuroblastoma

Asiakirjat

GIMEN-kennot

Cell line · Tuotenumero 300179

GIMEN-solulinja on peräisin pienen lapsen luuytimen etäpesäkkeestä; lapsella oli diagnosoitu vaiheen IV neuroblastooma. Nämä solut luokitellaan N-tyypiksi...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

GIMEN-solulinja on peräisin IV-vaiheen neuroblastoomaan sairastuneen nuoren lapsen luuydinmetastaasista. Nämä solut luokitellaan N-tyypin soluiksi, mikä tyypillisesti viittaa neuroblastiseen fenotyyppiin, jolle on ominaista suuri solutiheys, neuronaaliset ominaisuudet ja kyky laajamittaiseen neuriitin kasvuun viljelyssä. GIMEN-solulinjan perustaminen tarjoaa arvokkaan mallin neuroblastooman aggressiivisten muotojen taustalla olevien molekyyli- ja solumekanismien tutkimiseen, erityisesti niiden, joihin liittyy metastaattinen leviäminen.

Toiminnallisesti GIMEN-soluilla on huomattavia vuorovaikutuksia eri sytokiinien ja kasvutekijöiden kanssa. Erityisesti niiden kasvua estää interferoni-gamma (IFN-gamma), sytokiini, joka tunnetaan sen antiproliferatiivisista vaikutuksista tiettyihin syöpäsoluihin. Lisäksi fibroblastikasvutekijä-2:lla (FGF-2) on näihin soluihin antimitogeeninen vaikutus, joka voidaan kumota lisäämällä IFN-gammaa. Tämä kumoaminen viittaa näiden tekijöiden väliseen monimutkaiseen vuorovaikutukseen solujen proliferaation moduloinnissa. Lisäksi interleukiini-1-beeta (IL-1-beeta) tehostaa FGF-2:n antimitogeenisiä vaikutuksia, mikä viittaa sen mahdolliseen rooliin kasvaimen kasvun dynamiikan säätelyssä neuroblastooman mikroympäristössä. Nämä vuorovaikutukset korostavat GIMEN-solulinjan hyödyllisyyttä tutkittaessa sytokiinien ja kasvutekijöiden vaikutusta neuroblastooman etenemiseen ja hoitovasteeseen.

Kudos
Aivot
Sairaus
Neuroblastooma
Metastaasikohde
Luuydin
Synonyymit
  • Gi-ME-N
  • Gi-MEN
  • GI-ME-N
  • Gimen
  • Gimen1
  • Gaslini Institute-ME-Neuroblastoma

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kaksinkertaistumisaika
25 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
GIMEN (Cytionin luettelonumero 300179)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1232

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
2–3 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

07Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
3,5 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen