PT-67

La lignée cellulaire PT-67 est une lignée cellulaire d'encapsidation de rétrovirus murins couramment utilisée pour la production de vecteurs rétroviraux destinés à l'administration de gènes. Dérivée des cellules NIH 3T3, la lignée PT-67 exprime les protéines structurales et les protéines d'enveloppe virales nécessaires à l'assemblage des particules rétrovirales. Elle est notamment optimisée pour produire des vecteurs pseudotypés avec la protéine d'enveloppe du virus de la leucémie murine 10A1 (MLV), ce qui permet leur entrée dans les cellules via plusieurs récepteurs de protéines de transport du phosphate, notamment le récepteur du virus de la leucémie du gibbon (Glvr-1 ou Pit-1) et le récepteur amphotrope Ram-1 (Pit-2).

La particularité des cellules d’encapsidation PT-67 réside dans la capacité de la protéine d’enveloppe 10A1 à utiliser à la fois les récepteurs Glvr-1 et Ram-1. Cette double spécificité réceptrice élargit considérablement la gamme d’hôtes des vecteurs rétroviraux produits par PT-67, ce qui en fait un outil avantageux pour la transduction d’une grande variété de types cellulaires chez différentes espèces, notamment les cellules humaines, murines et de rat. Par exemple, les vecteurs rétroviraux pseudotypés 10A1 peuvent transduire efficacement les cellules murines NIH 3T3 et les fibroblastes humains en exploitant ces récepteurs. Cependant, les profils d’utilisation des récepteurs sont spécifiques à l’espèce et au tissu, comme l’ont montré des études dans lesquelles les vecteurs pseudotypés 10A1 utilisent efficacement Ram-1 mais présentent une efficacité variable avec Glvr-1 dans différentes lignées cellulaires humaines et de rongeurs.

Les vecteurs rétroviraux produits à partir de cellules PT-67 sont exempts de virus auxiliaires, ce qui garantit la sécurité et l’efficacité des expériences de transfert génique. Cela fait de PT-67 un outil précieux pour l’administration stable de gènes dans des applications expérimentales et thérapeutiques, en particulier lorsque l’on souhaite une transduction sur un large éventail d’hôtes. Le développement et l’optimisation des cellules d’encapsidation PT-67 ont favorisé les progrès en thérapie génique, permettant l’introduction de gènes thérapeutiques dans les cellules cibles avec une spécificité et une efficacité accrues.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie