PT-67

Cellinjen PT-67 är en murin retrovirus-förpackningscellinje som ofta används för produktion av retrovirala vektorer för genöverföring. PT-67 härstammar från NIH 3T3-celler och uttrycker virala strukturproteiner och hölje-proteiner som är nödvändiga för sammansättningen av retrovirala partiklar. Den är framför allt optimerad för att producera vektorer pseudotyperade med hölje-proteinet från det murina leukemiviruset 10A1 (MLV), vilket möjliggör inträde i celler via flera fosfattransportproteinreceptorer, däribland receptorn för gibbonapans leukemivirus (Glvr-1 eller Pit-1) och den amfotropa receptorn Ram-1 (Pit-2).

Det unika med PT-67-förpackningscellerna ligger i 10A1-höljeproteinets förmåga att utnyttja både Glvr-1- och Ram-1-receptorerna. Denna dubbla receptorspecificitet utvidgar avsevärt värdspektrumet för de retrovirala vektorerna som produceras av PT-67, vilket gör det fördelaktigt för transduktion av en mängd olika celltyper hos olika arter, inklusive mänskliga celler samt celler från möss och råttor. Till exempel kan de 10A1-pseudotypade retrovirala vektorerna effektivt transducera murina NIH 3T3-celler och humana fibroblaster genom att utnyttja dessa receptorer. Receptoranvändningsmönstren är dock art- och vävnadsspecifika, vilket har observerats i studier där 10A1-pseudotypade vektorer effektivt utnyttjar Ram-1 men uppvisar varierande effektivitet med Glvr-1 i olika humana och gnagarcellinjer.

Retrovirala vektorer som produceras med hjälp av PT-67-celler är fria från hjälpvirus, vilket garanterar säkerhet och effektivitet i genöverföringsexperiment. Detta gör PT-67 till ett värdefullt verktyg för stabil genöverföring i experimentella och terapeutiska tillämpningar, särskilt där transduktion med ett brett värdspektrum önskas. Utvecklingen och optimeringen av PT-67-förpackningsceller har underlättat framsteg inom genterapi och möjliggjort leverans av terapeutiska gener till målceller med förbättrad specificitet och effektivitet.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring