PT-67

PT-67-cellelinjen er en museretrovirus-pakkecellelinje, der ofte anvendes til produktion af retrovirale vektorer til genoverførsel. PT-67 stammer fra NIH 3T3-celler og udtrykker de virale strukturproteiner og kappe-proteiner, der er nødvendige for samlingen af retrovirale partikler. Den er især optimeret til at producere vektorer, der er pseudotypiseret med 10A1-museleukæmivirusets (MLV) kappe-protein, hvilket muliggør indtrængning i celler via flere fosfattransportproteinreceptorer, herunder gibbon-abe-leukæmivirusreceptoren (Glvr-1 eller Pit-1) og den amfotrope receptor Ram-1 (Pit-2).

Det unikke ved PT-67-pakkeceller ligger i 10A1-kappeproteinets evne til at udnytte både Glvr-1- og Ram-1-receptorerne. Denne dobbelte receptorspecificitet udvider værtsområdet for de retrovirale vektorer, der produceres af PT-67, betydeligt, hvilket gør det fordelagtigt til transduktion af en række forskellige celletyper på tværs af arter, herunder humane, mus- og rotteceller. For eksempel kan de 10A1-pseudotypede retrovirale vektorer effektivt transducere murine NIH 3T3-celler og humane fibroblaster ved at udnytte disse receptorer. Receptorbrugsmønstrene er dog arts- og vævsspecifikke, hvilket er observeret i undersøgelser, hvor 10A1-pseudotypede vektorer effektivt udnytter Ram-1, men viser varierende effektivitet med Glvr-1 i forskellige humane og gnaver-cellelinjer.

Retrovirale vektorer produceret ved hjælp af PT-67-celler er fri for hjælpervirus, hvilket sikrer sikkerhed og effektivitet i genoverførselsforsøg. Dette gør PT-67 til et værdifuldt værktøj til stabil genlevering i eksperimentelle og terapeutiske anvendelser, især hvor transduktion med et bredt værtsområde er ønsket. Udviklingen og optimeringen af PT-67-pakkeceller har fremmet fremskridt inden for genterapi og muliggjort levering af terapeutiske gener til målceller med forbedret specificitet og effektivitet.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring