PT-67

A linhagem celular PT-67 é uma linhagem de células de empacotamento de retrovírus murino comumente utilizada para a produção de vetores retrovirais com o objetivo de entrega de genes. Derivada das células NIH 3T3, a PT-67 expressa proteínas estruturais virais e proteínas de envelope necessárias para a montagem de partículas retrovirais. Notavelmente, ela é otimizada para produzir vetores pseudotipados com a proteína de envelope do vírus da leucemia murina 10A1 (MLV), o que permite a entrada nas células por meio de múltiplos receptores de proteínas de transporte de fosfato, incluindo o receptor do vírus da leucemia do gibão (Glvr-1 ou Pit-1) e o receptor anfotrópico Ram-1 (Pit-2).

A característica única das células de empacotamento PT-67 reside na capacidade da proteína de envelope 10A1 de utilizar tanto o receptor Glvr-1 quanto o Ram-1. Essa especificidade de receptor duplo amplia significativamente a gama de hospedeiros dos vetores retrovirais produzidos pelo PT-67, tornando-o vantajoso para a transdução de uma variedade de tipos de células em diferentes espécies, incluindo células humanas, de camundongos e de ratos. Por exemplo, os vetores retrovirais pseudotipados com 10A1 podem transduzir eficientemente células NIH 3T3 murinas e fibroblastos humanos ao aproveitar esses receptores. No entanto, os padrões de uso dos receptores são específicos por espécie e tecido, conforme observado em estudos nos quais vetores pseudotipados com 10A1 utilizam o Ram-1 de forma eficiente, mas apresentam eficiência variável com o Glvr-1 em diferentes linhagens celulares humanas e de roedores.

Os vetores retrovirais produzidos com células PT-67 são livres de vírus auxiliares, garantindo segurança e eficiência em experimentos de transferência gênica. Isso torna o PT-67 uma ferramenta valiosa para a entrega estável de genes em aplicações experimentais e terapêuticas, particularmente quando se deseja uma transdução com ampla gama de hospedeiros. O desenvolvimento e a otimização das células de empacotamento PT-67 facilitaram avanços na terapia gênica, permitindo a entrega de genes terapêuticos em células-alvo com maior especificidade e eficiência.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.