PT-67

A linha celular PT-67 é uma linha celular murina de empacotamento de retrovírus, frequentemente utilizada para a produção de vetores retrovirais com o objetivo de transferência genética. Derivada das células NIH 3T3, a PT-67 expressa as proteínas estruturais virais e as proteínas do envelope necessárias para a montagem das partículas retrovirais. Notavelmente, está otimizada para produzir vetores pseudotipados com a proteína de envelope do vírus da leucemia murina (MLV) 10A1, o que permite a entrada nas células através de múltiplos recetores de proteínas de transporte de fosfato, incluindo o recetor do vírus da leucemia do gibão (Glvr-1 ou Pit-1) e o recetor anfotrópico Ram-1 (Pit-2).

A característica única das células de empacotamento PT-67 reside na capacidade da proteína de envelope 10A1 de utilizar tanto o recetor Glvr-1 como o recetor Ram-1. Esta dupla especificidade de recetores alarga significativamente o leque de hospedeiros dos vetores retrovirais produzidos pelo PT-67, tornando-o vantajoso para a transdução de uma variedade de tipos de células em diferentes espécies, incluindo células humanas, de ratinho e de rato. Por exemplo, os vetores retrovirais pseudotipados com 10A1 podem transduzir eficientemente células NIH 3T3 murinas e fibroblastos humanos, tirando partido destes recetores. No entanto, os padrões de utilização dos recetores são específicos de cada espécie e tecido, tal como observado em estudos em que os vetores pseudotipados com 10A1 utilizam eficientemente o Ram-1, mas apresentam eficiência variável com o Glvr-1 em diferentes linhas celulares humanas e de roedores.

Os vetores retrovirais produzidos utilizando células PT-67 estão isentos de vírus auxiliares, garantindo segurança e eficiência em experiências de transferência genética. Isto torna as células PT-67 uma ferramenta valiosa para a entrega estável de genes em aplicações experimentais e terapêuticas, particularmente quando se pretende uma transdução com um amplo leque de hospedeiros. O desenvolvimento e a otimização das células de empacotamento PT-67 facilitaram os avanços na terapia genética, permitindo a entrega de genes terapêuticos nas células-alvo com maior especificidade e eficiência.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia