PT-67

De PT-67-cellijn is een muizenretrovirus-verpakkingscellijn die veel wordt gebruikt voor de productie van retrovirale vectoren voor genoverdracht. De PT-67-cellijn is afgeleid van NIH 3T3-cellen en brengt virale structuureiwitten en envelopeiwitten tot expressie die nodig zijn voor de assemblage van retrovirale deeltjes. De lijn is met name geoptimaliseerd voor de productie van vectoren die zijn gepseudotypeerd met het envelopeiwit van het 10A1-muizenleukemievirus (MLV), waardoor deze vectoren cellen kunnen binnendringen via verschillende fosfaattransportproteïnereceptoren, waaronder de receptor van het gibbon-leukemievirus (Glvr-1 of Pit-1) en de amfotrope receptor Ram-1 (Pit-2).

Het unieke kenmerk van PT-67-verpakkingscellen ligt in het vermogen van het 10A1-envelopeiwit om zowel Glvr-1- als Ram-1-receptoren te gebruiken. Deze dubbele receptorspecificiteit breidt het gastheerbereik van door PT-67 geproduceerde retrovirale vectoren aanzienlijk uit, waardoor het geschikt is voor het transduceren van een verscheidenheid aan celtypen bij verschillende soorten, waaronder menselijke, muizen- en rattencellen. Zo kunnen de met 10A1 gepseudotypeerde retrovirale vectoren bijvoorbeeld op efficiënte wijze muizen-NIH-3T3-cellen en menselijke fibroblasten transduceren door gebruik te maken van deze receptoren. Het gebruikspatroon van de receptoren is echter soort- en weefselspecifiek, zoals blijkt uit studies waarin met 10A1 gepseudotypeerde vectoren Ram-1 efficiënt benutten, maar een variabele efficiëntie vertonen met Glvr-1 in verschillende menselijke en knaagdiercellijnen.

Retrovirale vectoren die met behulp van PT-67-cellen worden geproduceerd, zijn vrij van helpervirussen, wat de veiligheid en efficiëntie bij genoverdrachtsexperimenten waarborgt. Dit maakt PT-67 tot een waardevol hulpmiddel voor stabiele genafgifte in experimentele en therapeutische toepassingen, met name wanneer transductie met een breed gastheerbereik gewenst is. De ontwikkeling en optimalisatie van PT-67-verpakkingscellen hebben vooruitgang in de gentherapie mogelijk gemaakt, waardoor therapeutische genen met verbeterde specificiteit en efficiëntie in doelcellen kunnen worden gebracht.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring