HaCaT-ras II-4

Les cellules HaCaT-ras II-4 constituent un modèle cellulaire remarquable et largement étudié en biologie. Ces cellules sont dérivées de kératinocytes de peau humaine spontanément immortalisés, connus sous le nom de cellules HaCaT, qui ont été modifiées par transfection avec l'oncogène c-Ha-ras (EJ). La sélection de ces cellules était basée sur leur résistance au G418, un antibiotique sélectif, comme décrit dans l'étude complète menée par Boukamp et al. en 1990.

Une caractéristique notable des cellules HaCaT-ras II-4 est leur caractère tumorigène. Lorsque ces cellules clonales sont injectées dans des souris Balb/c-nu/nu, elles présentent un comportement fascinant en formant des carcinomes épidermoïdes hautement différenciés et localement invasifs. Cette propriété unique permet aux chercheurs d'explorer les mécanismes de développement et de progression des tumeurs dans un environnement expérimental contrôlé.

Les cellules HaCaT-ras II-4 proviennent principalement de la population caucasienne, ce qui garantit la pertinence d'un groupe ethnique spécifique dans les recherches scientifiques. Leur origine et leurs caractéristiques en font une ressource inestimable pour les chercheurs intéressés par l'étude de divers aspects de la biologie et de la différenciation de la peau.

Ces cellules possèdent un phénotype partiellement ou totalement différencié dans des conditions de culture typiques. Ce phénotype est attribué à la présence abondante de calcium dans les milieux traditionnels et dans le sérum bovin fœtal, qui fournit un environnement idéal pour que les cellules présentent des caractéristiques ressemblant à celles des cellules cutanées matures. Cette caractéristique permet aux chercheurs d'étudier les processus complexes impliqués dans le développement de la peau, la cicatrisation des plaies et la différenciation épidermique.

Grâce à leur nature tumorigène et à leur capacité à reproduire la biologie de la peau in vitro, les cellules HaCaT-ras II-4 offrent une opportunité unique d'explorer les voies moléculaires associées au cancer de la peau et à d'autres troubles liés à la peau. En utilisant ce modèle cellulaire exceptionnel, les chercheurs peuvent mieux comprendre les mécanismes sous-jacents de la tumorigenèse, le potentiel invasif et les interventions thérapeutiques.

Les cellules HaCaT-ras II-4 sont un outil essentiel pour la recherche en sciences biologiques, en particulier pour la biologie de la peau et les études de différenciation. Leur origine de kératinocytes humains spontanément immortalisés, leur modification par l'oncogène c-Ha-ras (EJ) et leur comportement tumorigène ultérieur chez la souris les rendent inestimables pour l'étude des maladies liées à la peau et des approches thérapeutiques. En exploitant les caractéristiques uniques des cellules HaCaT-ras II-4, les chercheurs peuvent approfondir leur compréhension de la biologie de la peau et contribuer à faire progresser les connaissances médicales et les options thérapeutiques pour divers troubles cutanés.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Jeter l'ancien milieu: Retirer le milieu usagé des flacons.
2. Laver les cellules: Ajouter 3-5 ml de PBS (sans calcium ni magnésium) aux flacons T25, ou 5-10 ml aux flacons T75, pour laver les cellules adhérentes.
3. Ajouter la solution d'EDTA: Couvrir complètement la couche de cellules avec une solution d'EDTA à 0,05 % fraîchement préparée - utiliser 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75.
4. Incubation: Incuber les flacons à 37 degrés Celsius pendant 10 minutes.
5. Ajouter la solution de trypsine/EDTA: Après l'incubation, ajouter une solution de trypsine/EDTA fraîchement préparée (0,05 % de trypsine, 0,025 % d'EDTA) aux flacons, en veillant à ce que les cellules soient entièrement recouvertes - utiliser 1 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75.
6. Surveiller le détachement: Observer les cellules, qui devraient se détacher en 1 à 2 minutes.
7. Neutraliser la trypsine: Ajouter du milieu de culture cellulaire contenant du FBS pour arrêter l'activité de la trypsine.
8. Transférer les cellules: Distribuer la suspension cellulaire dans de nouveaux flacons pré-remplis de milieu de culture frais.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie