HaCaT-ras II-4

HaCaT-ras II-4 šūnas ir ievērojams un plaši pētīts šūnu modelis bioloģijas zinātnē. Šīs šūnas ir iegūtas no spontāni imortalizētiem cilvēka ādas keratinocītiem, pazīstamiem kā HaCaT šūnas, kas modificētas, izmantojot transfekciju ar c-Ha-ras (EJ) onkogēnu. Šo šūnu atlases pamatā bija to izturība pret selektīvu antibiotiku G418, kā aprakstīts Boukamp et al. 1990. gadā veiktajā visaptverošajā pētījumā.

HaCaT-ras II-4 šūnām ir raksturīga viena ievērojama iezīme - tās ir audzējainas. Kad šīs klona šūnas injicē Balb/c-nu/nu/nu pelēm, tās uzvedas fascinējoši, veidojot augsti diferencētas un lokāli invazīvas plakanšūnu karcinomas. Šī unikālā īpašība ļauj pētniekiem kontrolētā eksperimentālā vidē pētīt audzēju attīstības un progresēšanas mehānismus.

HaCaT-ras II-4 šūnas pārsvarā ir iegūtas no Kaukāza populācijas, nodrošinot to atbilstību konkrētai etniskajai grupai zinātniskajos pētījumos. To izcelsme un īpašības padara tās par nenovērtējamu resursu pētniekiem, kurus interesē dažādu ādas bioloģijas un diferenciācijas aspektu izpēte.

Šīm šūnām raksturīgs daļēji vai pilnībā diferencēts fenotips tipiskos kultūras apstākļos. Šis fenotips ir saistīts ar bagātīgu kalcija klātbūtni gan tradicionālajā barotnē, gan fetālajā liellopu serumā, kas nodrošina ideālu vidi, lai šūnām būtu līdzīgas nobriedušām ādas šūnām raksturīgās īpašības. Šī īpašība ļauj pētniekiem pētīt sarežģītos procesus, kas saistīti ar ādas attīstību, brūču dzīšanu un epidermas diferenciāciju.

HaCaT-ras II-4 šūnas, kas ir tumorigēnas un spēj atkārtot ādas bioloģiju in vitro, sniedz unikālu iespēju pētīt molekulāros ceļus, kas saistīti ar ādas vēzi un citām ar ādu saistītām slimībām. Izmantojot šo izcilo šūnu modeli, pētnieki var gūt dziļāku ieskatu par audzēju rašanās pamatmehānismiem, invazīvo potenciālu un terapeitisko iejaukšanos.

HaCaT-ras II-4 šūnas ir svarīgs instruments bioloģijas zinātņu pētniecībā, jo īpaši ādas bioloģijas un diferenciācijas pētījumos. To izcelsme no spontāni imortizētiem cilvēka ādas keratinocītiem, modifikācija ar c-Ha-ras (EJ) onkogēnu un turpmākā tumorogēnā uzvedība pelēs padara tās nenovērtējamas ar ādu saistītu slimību un terapeitisko pieeju pētniecībā. Izmantojot HaCaT-ras II-4 šūnu unikālās īpašības, pētnieki var iegūt dziļāku izpratni par ādas bioloģiju un veicināt medicīnisko zināšanu un dažādu ādas slimību ārstēšanas iespēju attīstību.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Izmetiet veco mediju: Izņemiet veco barotni no kolbām.
2. Izskalojiet šūnas: Pievienojiet 3-5 ml PBS (bez kalcija un magnija) T25 kolbām vai 5-10 ml T75 kolbām, lai izskalotu pielipušās šūnas.
3. Pievienot EDTA šķīdumu: Pilnībā pārklājiet šūnu slāni ar svaigi sagatavotu 0,05 % EDTA šķīdumu - T25 kolbām izmantojiet 1-2 ml, bet T75 kolbām - 2,5 ml.
4. Inkubēšana: Kolbas inkubēt 37 °C temperatūrā 10 minūtes.
5. Pievienojiet tripsīna/EDTA šķīdumu: Pēc inkubācijas kolbām pievieno svaigi sagatavotu tripsīna/EDTA šķīdumu (0,05 % tripsīns, 0,025 % EDTA), pārliecinoties, ka šūnas ir pilnībā aptvertas - T25 kolbām izmanto 1 ml, bet T75 kolbām - 2,5 ml.
6. Uzraudzīt atdalīšanos: Novērojiet šūnas, kurām vajadzētu atdalīties 1-2 minūšu laikā.
7. Neitralizēt tripsīnu: Pievienojiet FBS saturošu šūnu barotni, lai apturētu tripsīna aktivitāti.
8. Pārnest šūnas: Šūnu suspensiju iepildīt jaunās kolbās, kas iepriekš piepildītas ar svaigu barotni.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu