HaCaT-ras II-4

Las células HaCaT-ras II-4 son un modelo celular notable y ampliamente estudiado en la ciencia biológica. Estas células derivan de queratinocitos de piel humana espontáneamente inmortalizados, conocidos como células HaCaT, que se modificaron mediante transfección con el oncogén c-Ha-ras (EJ). La selección de estas células se basó en su resistencia a G418, un antibiótico selectivo, como se describe en el exhaustivo estudio realizado por Boukamp et al. en 1990.

Una característica notable de las células HaCaT-ras II-4 es su naturaleza tumorigénica. Cuando estas células clonales se inyectan en ratones Balb/c-nu/nu, muestran un comportamiento fascinante al formar carcinomas de células escamosas altamente diferenciados y localmente invasivos. Esta propiedad única permite a los investigadores explorar los mecanismos de desarrollo y progresión tumoral en un entorno experimental controlado.

Las células HaCaT-ras II-4 proceden predominantemente de la población caucásica, lo que garantiza la relevancia de un grupo étnico específico en las investigaciones científicas. Su origen y características las convierten en un recurso inestimable para los investigadores interesados en estudiar diversos aspectos de la biología y la diferenciación de la piel.

Estas células poseen un fenotipo de parcial a totalmente diferenciado en condiciones de cultivo típicas. Este fenotipo se atribuye a la abundante presencia de calcio tanto en los medios de cultivo tradicionales como en el suero bovino fetal, que proporciona un entorno ideal para que las células presenten características similares a las de las células cutáneas maduras. Esta característica permite a los investigadores investigar los intrincados procesos que intervienen en el desarrollo de la piel, la cicatrización de heridas y la diferenciación epidérmica.

Gracias a su naturaleza tumorigénica y a su capacidad para reproducir la biología de la piel in vitro, las células HaCaT-ras II-4 ofrecen una oportunidad única para explorar las vías moleculares asociadas al cáncer de piel y a otros trastornos relacionados con la piel. Utilizando este excepcional modelo celular, los investigadores pueden profundizar en los mecanismos subyacentes de la tumorigénesis, el potencial invasivo y las intervenciones terapéuticas.

Las células HaCaT-ras II-4 son una herramienta vital para la investigación en ciencias biológicas, concretamente en estudios de biología y diferenciación de la piel. Su origen a partir de queratinocitos de piel humana espontáneamente inmortalizados, su modificación con el oncogén c-Ha-ras (EJ) y su posterior comportamiento tumorigénico en ratones las convierten en un recurso inestimable para investigar enfermedades relacionadas con la piel y enfoques terapéuticos. Aprovechando las características únicas de las células HaCaT-ras II-4, los investigadores pueden profundizar en el conocimiento de la biología de la piel y contribuir al avance de los conocimientos médicos y las opciones de tratamiento de diversos trastornos cutáneos.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Deseche el medio antiguo: Retire el medio antiguo de los matraces.
2. Lavar las células: Añadir 3-5 ml de PBS (sin calcio ni magnesio) a los matraces T25, o 5-10 ml a los matraces T75, para lavar las células adherentes.
3. Añadir solución de EDTA: Cubrir completamente la capa celular con una solución de EDTA al 0,05% recién preparada; utilizar 1-2 ml para los matraces T25 y 2,5 ml para los matraces T75.
4. Incubación: Incubar los matraces a 37 grados Celsius durante 10 minutos.
5. Añadir solución de tripsina/EDTA: Tras la incubación, añada una solución de tripsina/EDTA recién preparada (tripsina al 0,05%, EDTA al 0,025%) a los matraces, asegurándose de que las células queden totalmente cubiertas; utilice 1 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75.
6. Controlar el desprendimiento: Observe las células, que deberían desprenderse en 1-2 minutos.
7. Neutralice la tripsina: Añadir medio de cultivo celular que contenga FBS para detener la actividad de la tripsina.
8. Transfiera las células: Dispensar la suspensión celular en nuevos matraces precargados con medio de cultivo fresco.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía