HaCaT-ras II-4

Клітини HaCaT-ras II-4 є чудовою і широко вивченою клітинною моделлю в біологічній науці. Ці клітини отримані зі спонтанно імморталізованих кератиноцитів шкіри людини, відомих як клітини HaCaT, які були модифіковані шляхом трансфекції онкогеном c-Ha-ras (EJ). Відбір цих клітин ґрунтувався на їхній стійкості до селективного антибіотика G418, як описано в комплексному дослідженні, проведеному Boukamp et al. в 1990 році.

Однією з важливих характеристик клітин HaCaT-ras II-4 є їхня пухлинна природа. При введенні цих клонованих клітин мишам лінії Balb/c-nu/nu вони демонструють дивовижну поведінку, утворюючи високодиференційовані та місцевоінвазивні плоскоклітинні карциноми. Ця унікальна властивість дозволяє дослідникам вивчати механізми розвитку та прогресування пухлин у контрольованому експериментальному середовищі.

Клітини HaCaT-ras II-4 переважно походять з європеоїдної популяції, що забезпечує релевантність конкретної етнічної групи в наукових дослідженнях. Їх походження та характеристики роблять їх безцінним ресурсом для дослідників, зацікавлених у вивченні різних аспектів біології та диференціювання шкіри.

Ці клітини мають частково або повністю диференційований фенотип за типових умов культивування. Цей фенотип пояснюється великою кількістю кальцію як у традиційних середовищах, так і в ембріональній сироватці великої рогатої худоби, що забезпечує ідеальне середовище для того, щоб клітини демонстрували характеристики, подібні до характеристик зрілих клітин шкіри. Ця особливість дозволяє дослідникам вивчати складні процеси, пов'язані з розвитком шкіри, загоєнням ран і диференціюванням епідермісу.

Завдяки своїй пухлинній природі та здатності відтворювати біологію шкіри in vitro, клітини HaCaT-ras II-4 пропонують унікальну можливість дослідити молекулярні шляхи, пов'язані з раком шкіри та іншими захворюваннями, пов'язаними зі шкірою. Використовуючи цю виняткову клітинну модель, дослідники можуть глибше зрозуміти основні механізми пухлиноутворення, інвазивний потенціал та терапевтичні втручання.

Клітини HaCaT-ras II-4 є життєво важливим інструментом для біологічних досліджень, зокрема в біології шкіри та дослідженнях диференціювання. Їхнє походження зі спонтанно імморталізованих кератиноцитів шкіри людини, модифікація онкогеном c-Ha-ras (EJ) і подальша пухлиногенна поведінка у мишей роблять їх безцінними для дослідження захворювань, пов'язаних зі шкірою, і терапевтичних підходів. Використовуючи унікальні характеристики клітин HaCaT-ras II-4, дослідники можуть глибше зрозуміти біологію шкіри і зробити свій внесок у розвиток медичних знань і методів лікування різних шкірних захворювань.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Викиньте старий носій: Видаліть старе середовище з колб.
2. Промийте клітини: Додайте 3-5 мл PBS (без кальцію і магнію) в колби T25 або 5-10 мл в колби T75, щоб відмити прилиплі клітини.
3. Додайте розчин ЕДТА: Повністю покрийте шар клітин свіжоприготованим 0,05% розчином ЕДТА - 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75.
4. Інкубація: Інкубуйте колби при 37 градусах Цельсія протягом 10 хвилин.
5. Додайте розчин трипсину/ЕДТА: Після інкубації додайте в колби свіжоприготований розчин трипсину/ЕДТА (0,05% трипсину, 0,025% ЕДТА), переконавшись, що клітини повністю покриті - використовуйте 1 мл для колб T25 і 2,5 мл для колб T75.
6. Простежте за відшаруванням: Спостерігайте за клітинами, які повинні відокремитися протягом 1-2 хвилин.
7. Нейтралізуйте трипсин: Додайте середовище для культивування клітин, що містить FBS, щоб зупинити активність трипсину.
8. Перенесіть клітини: Розподіліть клітинну суспензію в нові колби, попередньо заповнені свіжим живильним середовищем.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>