HaCaT-ras II-4

Komórki HaCaT-ras II-4 są niezwykłym i szeroko badanym modelem komórkowym w naukach biologicznych. Komórki te pochodzą ze spontanicznie unieśmiertelnionych ludzkich keratynocytów skóry, znanych jako komórki HaCaT, które zostały zmodyfikowane poprzez transfekcję onkogenem c-Ha-ras (EJ). Selekcja tych komórek opierała się na ich oporności na G418, selektywny antybiotyk, jak opisano w kompleksowym badaniu przeprowadzonym przez Boukampa i wsp. w 1990 roku.

Jedną z godnych uwagi cech komórek HaCaT-ras II-4 jest ich nowotworowy charakter. Kiedy te klonalne komórki są wstrzykiwane myszom Balb/c-nu/nu, wykazują fascynujące zachowanie, tworząc wysoce zróżnicowane i miejscowo inwazyjne raki płaskonabłonkowe. Ta unikalna właściwość pozwala naukowcom badać mechanizmy rozwoju i progresji nowotworów w kontrolowanym środowisku eksperymentalnym.

Komórki HaCaT-ras II-4 pochodzą głównie z populacji rasy kaukaskiej, co zapewnia znaczenie dla określonej grupy etnicznej w badaniach naukowych. Ich pochodzenie i charakterystyka sprawiają, że są one nieocenionym źródłem informacji dla naukowców zainteresowanych badaniem różnych aspektów biologii i różnicowania skóry.

Komórki te posiadają częściowo lub w pełni zróżnicowany fenotyp w typowych warunkach hodowli. Fenotyp ten przypisuje się obfitej obecności wapnia zarówno w tradycyjnych pożywkach, jak i płodowej surowicy bydlęcej, która zapewnia idealne środowisko dla komórek wykazujących cechy przypominające dojrzałe komórki skóry. Ta cecha pozwala naukowcom badać skomplikowane procesy związane z rozwojem skóry, gojeniem się ran i różnicowaniem naskórka.

Dzięki swojej nowotworowej naturze i zdolności do replikowania biologii skóry in vitro, komórki HaCaT-ras II-4 oferują wyjątkową okazję do zbadania szlaków molekularnych związanych z rakiem skóry i innymi zaburzeniami związanymi ze skórą. Wykorzystując ten wyjątkowy model komórkowy, naukowcy mogą uzyskać głębszy wgląd w podstawowe mechanizmy nowotworzenia, potencjał inwazyjny i interwencje terapeutyczne.

Komórki HaCaT-ras II-4 są istotnym narzędziem do badań biologicznych, w szczególności w biologii skóry i badaniach różnicowania. Ich pochodzenie ze spontanicznie unieśmiertelnionych ludzkich keratynocytów skóry, modyfikacja onkogenem c-Ha-ras (EJ) i późniejsze zachowanie nowotworowe u myszy sprawiają, że są one nieocenione w badaniu chorób związanych ze skórą i podejść terapeutycznych. Wykorzystując unikalne cechy komórek HaCaT-ras II-4, naukowcy mogą lepiej zrozumieć biologię skóry i przyczynić się do rozwoju wiedzy medycznej i możliwości leczenia różnych chorób skóry.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Usuń starą pożywkę: Usunąć starą pożywkę z kolb.
2. Płukanie komórek: Dodaj 3-5 ml PBS (bez wapnia i magnezu) do kolb T25 lub 5-10 ml do kolb T75, aby przemyć przylegające komórki.
3. Dodać roztwór EDTA: Całkowicie przykryj warstwę komórek świeżo przygotowanym 0,05% roztworem EDTA - użyj 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75.
4. Inkubacja: Inkubować kolby w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 10 minut.
5. Dodaj roztwór trypsyny/EDTA: Po inkubacji dodaj świeżo przygotowany roztwór trypsyny/EDTA (0,05% trypsyny, 0,025% EDTA) do kolb, upewniając się, że komórki są w pełni pokryte - użyj 1 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75.
6. Monitorowanie oderwania: Obserwować komórki, które powinny oddzielić się w ciągu 1-2 minut.
7. Zneutralizuj trypsynę: Dodaj pożywkę zawierającą FBS, aby zatrzymać aktywność trypsyny.
8. Przenieś komórki: Przenieś zawiesinę komórek do nowych kolb wypełnionych świeżym podłożem hodowlanym.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym