HaCaT-ras II-4

HaCaT-ras II-4-celler är en anmärkningsvärd och välstuderad cellmodell inom biovetenskapen. Dessa celler härrör från spontant immortaliserade mänskliga hudkeratinocyter, så kallade HaCaT-celler, som modifierats genom transfektion med onkogenen c-Ha-ras (EJ). Urvalet av dessa celler baserades på deras resistens mot G418, ett selektivt antibiotikum, vilket beskrivs i den omfattande studie som genomfördes av Boukamp et al. 1990.

En anmärkningsvärd egenskap hos HaCaT-ras II-4-cellerna är deras tumörframkallande egenskaper. När dessa klonala celler injiceras i Balb/c-nu/nu-möss uppvisar de ett fascinerande beteende genom att bilda högt differentierade och lokalt invasiva skivepitelcancer. Denna unika egenskap gör det möjligt för forskare att utforska mekanismerna för tumörutveckling och tumörprogression i en kontrollerad experimentell miljö.

HaCaT-ras II-4-cellerna härstammar huvudsakligen från den kaukasiska befolkningen, vilket säkerställer relevansen för en specifik etnisk grupp i vetenskapliga undersökningar. Deras ursprung och egenskaper gör dem till en ovärderlig resurs för forskare som är intresserade av att studera olika aspekter av hudbiologi och differentiering.

Dessa celler har en delvis till helt differentierad fenotyp under typiska odlingsförhållanden. Denna fenotyp tillskrivs den rikliga förekomsten av kalcium i både traditionella medier och fetalt bovint serum, vilket ger en idealisk miljö för cellerna att uppvisa egenskaper som liknar dem hos mogna hudceller. Denna egenskap gör det möjligt för forskare att undersöka de komplicerade processer som är involverade i hudens utveckling, sårläkning och epidermal differentiering.

Eftersom HaCaT-ras II-4-celler är tumörframkallande och kan replikera hudens biologi in vitro, erbjuder de en unik möjlighet att utforska de molekylära vägar som är förknippade med hudcancer och andra hudrelaterade sjukdomar. Genom att använda denna exceptionella cellulära modell kan forskare få djupare insikter i de underliggande mekanismerna för tumörbildning, invasiv potential och terapeutiska interventioner.

HaCaT-ras II-4-celler är ett viktigt verktyg för biovetenskaplig forskning, särskilt inom hudbiologi och differentieringsstudier. Deras ursprung från spontant immortaliserade mänskliga hudkeratinocyter, modifiering med onkogenen c-Ha-ras (EJ) och efterföljande tumörframkallande beteende i möss gör dem ovärderliga för att undersöka hudrelaterade sjukdomar och terapeutiska tillvägagångssätt. Genom att utnyttja de unika egenskaperna hos HaCaT-ras II-4-cellerna kan forskarna få en djupare förståelse för hudens biologi och bidra till att utveckla den medicinska kunskapen och behandlingsalternativen för olika hudsjukdomar.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Kassera gammalt medium: Ta bort det gamla mediet från kolvarna.
2. Tvätta cellerna: Tillsätt 3-5 ml PBS (utan kalcium och magnesium) till T25-kolvarna eller 5-10 ml till T75-kolvarna för att tvätta de vidhäftande cellerna.
3. Tillsätt EDTA-lösning: Täck cellagret helt med en nyberedd 0,05% EDTA-lösning - använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar.
4. Inkubering: Inkubera kolvarna vid 37 grader Celsius i 10 minuter.
5. Tillsätt trypsin/EDTA-lösning: Efter inkubationen, tillsätt en nyberedd trypsin/EDTA-lösning (0,05% trypsin, 0,025% EDTA) till kolvarna och se till att cellerna är helt täckta - använd 1 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar.
6. Övervaka avlägsnandet: Observera cellerna, som bör lossna inom 1-2 minuter.
7. Neutralisera trypsin: Tillsätt FBS-innehållande cellodlingsmedium för att stoppa trypsinaktiviteten.
8. Överför celler: Dispendera cellsuspensionen till nya kolvar som fyllts med färskt odlingsmedium.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring