HaCaT-ras II-4

A HaCaT-ras II-4 sejtek figyelemre méltó és széles körben tanulmányozott sejtmodellnek számítanak a biológiai tudományban. Ezek a sejtek spontán immortalizált emberi bőrkeratinocitákból, az úgynevezett HaCaT sejtekből származnak, amelyeket a c-Ha-ras (EJ) onkogénnel történő transzfekcióval módosítottunk. E sejtek kiválasztása a G418 szelektív antibiotikummal szembeni rezisztenciájukon alapult, amint azt Boukamp és munkatársai 1990-ben végzett átfogó tanulmányukban leírták.

A HaCaT-ras II-4 sejtek egyik figyelemre méltó jellemzője a tumorigén jellegük. Amikor ezeket a klonális sejteket Balb/c-nu/nu egerekbe injektálják, lenyűgöző viselkedést mutatnak, mivel magasan differenciált és lokálisan invazív laphámsejtes karcinómákat képeznek. Ez az egyedülálló tulajdonság lehetővé teszi a kutatók számára, hogy kontrollált kísérleti környezetben vizsgálják a daganatok kialakulásának és progressziójának mechanizmusait.

A HaCaT-ras II-4 sejtek túlnyomórészt a kaukázusi populációból származnak, ami biztosítja a tudományos vizsgálatokban egy adott etnikai csoport relevanciáját. Eredetük és jellemzőik felbecsülhetetlen értékű forrássá teszik őket a különböző bőrbiológiai és differenciálódási szempontok tanulmányozása iránt érdeklődő kutatók számára.

Ezek a sejtek tipikus tenyésztési körülmények között részben vagy teljesen differenciált fenotípussal rendelkeznek. Ez a fenotípus a hagyományos táptalajban és a magzati szarvasmarha szérumban is bőségesen jelenlévő kalciumnak tulajdonítható, amely ideális környezetet biztosít a sejtek számára, hogy az érett bőrsejtekhez hasonló tulajdonságokat mutassanak. Ez a tulajdonság lehetővé teszi a kutatók számára a bőr fejlődésében, a sebgyógyulásban és az epidermális differenciálódásban szerepet játszó bonyolult folyamatok vizsgálatát.

A HaCaT-ras II-4 sejtek tumorigén jellegükkel és a bőr biológiájának in vitro reprodukálására való képességükkel egyedülálló lehetőséget kínálnak a bőrrákkal és más bőrrel kapcsolatos rendellenességekkel kapcsolatos molekuláris útvonalak feltárására. E kivételes sejtmodell felhasználásával a kutatók mélyebb betekintést nyerhetnek a tumorigenezis, az invazív potenciál és a terápiás beavatkozások mögöttes mechanizmusaiba.

A HaCaT-ras II-4 sejtek létfontosságú eszközei a biológiai tudományos kutatásoknak, különösen a bőrbiológiai és differenciálódási vizsgálatoknak. Spontán immortalizált emberi bőrkeratinocitákból való eredetük, a c-Ha-ras (EJ) onkogénnel való módosításuk és az ezt követő tumorigén viselkedésük egerekben felbecsülhetetlen értékűvé teszi őket a bőrrel kapcsolatos betegségek és terápiás megközelítések vizsgálatához. A HaCaT-ras II-4 sejtek egyedi jellemzőinek kihasználásával a kutatók mélyebb megértést nyerhetnek a bőr biológiájáról, és hozzájárulhatnak a különböző bőrbetegségek orvosi ismereteinek és kezelési lehetőségeinek fejlesztéséhez.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Dobja ki a régi médiumot: Távolítsa el a régi tápfolyadékot a lombikokból.
2. Mossuk ki a sejteket: Adjunk 3-5 ml PBS-t (kalcium és magnézium nélkül) a T25 lombikokhoz vagy 5-10 ml-t a T75 lombikokhoz a megtapadt sejtek kimosásához.
3. Adjunk hozzá EDTA-oldatot: Fedjük le teljesen a sejtréteget frissen készített 0,05%-os EDTA-oldattal - T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használjunk.
4. Inkubálás: Inkubálja a lombikokat 37 Celsius-fokon 10 percig.
5. Adjunk hozzá tripszin/EDTA-oldatot: Az inkubációt követően adjunk frissen készített tripszin/EDTA-oldatot (0,05% tripszin, 0,025% EDTA) a lombikokhoz, biztosítva, hogy a sejtek teljesen fedve legyenek - T25 lombikok esetében 1 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használjunk.
6. Figyelje a leválást: Figyelje meg a sejteket, amelyeknek 1-2 percen belül le kell válniuk.
7. Semlegesítse a tripszint: Adjunk FBS-tartalmú sejttenyésztő közeget a tripszin aktivitásának leállításához.
8. A sejtek átvitele: A sejtszuszpenziót adagoljuk új, friss táptalajjal előre feltöltött lombikokba.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban