Tartalomra ugrás
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Szövet
Csont
Betegség
Osteosarcoma

Dokumentumok

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Termékszám 300448

Az U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo egy génmódosított sejtvonal, amelyet az emberi osteosarcoma U-2 OS sejtekből állítottak elő. Ezt a sejtvonalat a következő módszerrel módosították...

€800.00adó és szállítási költség nélkül
Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

Az U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo egy genetikailag módosított sejtvonal, amely az emberi csontritkulásos U-2 OS sejtekből származik. Ezt a sejtvonalat CRISPR-Cas9 technológiával módosították, hogy a NUP96 génlókuszba HaloTag-et építsenek be. A NUP96, a nukleáris pórus komplex része, kritikus szerepet játszik a nukleáris transzportban és a sejtek szabályozásában. A HaloTag bevezetése lehetővé teszi a NUP96 dinamikájának és a sejten belüli kölcsönhatásainak pontos vizualizálását és biokémiai jellemzését.

A fluoreszcens ligandumok vagy más szondák kovalens rögzítésének megkönnyítésével a HaloTag lehetővé teszi a valós idejű képalkotást, és hatékony eszközt biztosít az élő sejtekben zajló nukleáris transzportmechanizmusok tanulmányozásához. Ezt a 252-es számú klónt a HaloTagged NUP96 stabil expressziója miatt választottuk ki, ami biztosítja a következetes teljesítményt a kísérleti elrendezésekben. Ez a tulajdonsága kiválóan alkalmassá teszi a nagy felbontású képalkotó technikák és a molekuláris kölcsönhatások vizsgálatára, ezáltal támogatva a fejlett sejtbiológiai kutatásokat, különösen a nukleáris működés és a genetikai szabályozás összefüggésében.

Szövet
Csont
Betegség
Osteosarcoma

02Osztályozás

Organizmus
Ember
Szex
Nő
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelszerű

04Azonosítók

Hivatkozás
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (Cytion katalógusszám 300448)
NCBI adóazonosító szám
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
Betétes
Az Ellenberg Labor (EMBL)

05Kifejeződés és fogékonyság

Fehérjeexpresszió
NUP96-Halo (endogén nukleáris pórus komplex 96 fehérje, Halo jelöléssel)

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükóz, w: stabil glutamin, w: 2,0 mM nátrium-piruvát, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion cikkszám: 820200a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Ültetési sűrűség
1 x 104 sejt/cm2
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
15 év
Etnikai hovatartozás
Kaukázusi