U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

Az U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 egy géntechnológiával módosított humán osteosarcoma sejtvonal, amely az U2OS szülői háttérből származik, és amelyben az endogén NUP133 lókuszt CRISPR/Cas9-mediált genomszerkesztéssel módosították, hogy C-terminális SNAPf tagot kódoljon. A NUP133 a Y-komplex (NUP107-160 komplex) központi komponense, amely egy strukturális alkomplex, amely elengedhetetlen a nukleáris pórus komplex (NPC) összeállításához és fenntartásához. A SNAPf kódoló szekvencia endogén lókuszba történő beépítésével a fúziós fehérje natív szabályozási kontroll alatt expresszálódik, megőrizve a fiziológiai expressziós szinteket és a szubcelluláris lokalizációt.

A SNAPf tag a SNAP-tag gyors jelölő változata, egy módosított O6-alkilguanin-DNS-alkil-transzferáz, amely kovalens reakcióba lép a benzilguanin-konjugált szubsztrátokkal. Ez lehetővé teszi a Nup133 rendkívül specifikus és sokoldalú fluoreszcens jelölését élő vagy fixált sejtekben, sejtáteresztő vagy sejtáteresztő SNAP szubsztrátok felhasználásával. Az U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 sejtekben a fúziós fehérje a nukleáris pórus komplexekre jellemző pontszerű mintázatban lokalizálódik a sejtmag membránján. Mivel a jelölés az endogén lókuszban történik, az NPC sztöchiometriája és architektúrája minimálisan zavart, így ez a modell alkalmas kvantitatív szuperfelbontású mikroszkópiára, egyedi molekulák nyomon követésére, valamint az NPC összeszerelésének és cseréjének kinetikai elemzésére.

Ez a sejtvonal robusztus platformot biztosít a nukleáris transzport, a nukleocitoplazmatikus transzport dinamikájának, az NPC biogenezisének az interfázis és a posztmitotikus nukleáris újrarendezés során, valamint a Y-komplex szerkezeti szerveződésének a pórusvázon belül történő tanulmányozásához. Az U2OS háttér lapos morfológiát és nagy magokat kínál, ami megkönnyíti a nagy felbontású képalkotást. Az U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 sejtek különösen alkalmasak pulzus-üldözéses jelölési kísérletekhez, korrelatív fény- és elektronmikroszkópiához, valamint többszínű képalkotási módszerekhez, további endogén jelöléssel ellátott nukleoporinekkel vagy transzportfaktorokkal kombinálva.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban