U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133は、親株U2OSを背景とする遺伝子改変ヒト骨肉腫細胞株であり、CRISPR/Cas9によるゲノム編集を用いて内因性NUP133遺伝子座を改変し、C末端にSNAPfタグをコードするようにしたものである。 NUP133は核孔複合体（NPC）の組立と維持に不可欠な構造サブコンプレックスであるYコンプレックス（NUP107-160コンプレックス）の中核構成要素である。内因性遺伝子座にSNAPfコード配列をフレーム内に導入することで、融合タンパク質は生体内の調節機構下で発現され、生理的発現レベルと細胞内局在が保持される。

SNAPfタグは、ベンジルグアニン結合基を有する基質と共有結合反応する改変型O6-アルキルグアニン-DNAアルキルトランスフェラーゼであるSNAPタグの高速標識変異体である。これにより、細胞透過性または非透過性のSNAP基質を用いて、生細胞または固定細胞内のNup133を高度に特異的かつ汎用的に蛍光標識することが可能となる。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133細胞では、融合タンパク質は核膜に局在し、核孔複合体（NPC）に特徴的な点状パターンを示す。タグ付けが内因性遺伝子座で発生するため、NPCの化学量論的組成と構造は最小限の擾乱しか受けず、このモデルは定量的超解像顕微鏡法、単一分子追跡、NPCの組み立てと分解の動的解析に適している。

この細胞株は、核輸送、核細胞質間輸送のダイナミクス、間期および分裂後核再構築時のNPC生合成、ならびに孔骨格内におけるY複合体の構造的組織化を研究するための堅牢なプラットフォームを提供する。 U2OS細胞株の背景は平坦な形態と大きな核を有し、高解像度イメージングを容易にする。U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133細胞は、パルス・チェイス標識実験、相関光電子顕微鏡法、および追加の内因性タグ付きヌクレオポリンや輸送因子との組み合わせによる多色イメージング法に特に適している。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。