U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 on geneettisesti muunnettu ihmisen osteosarkoomasolulinja, joka on johdettu vanhemmasta U2OS-taustasta, jossa endogeeninen NUP133-lokus on muunnettu CRISPR/Cas9-välitteisellä genomin muokkauksella koodaamaan C-terminaalinen SNAPf-tunniste. NUP133 on Y-kompleksin (NUP107-160-kompleksi) ydinkomponentti, rakenteellinen alikompleksi, joka on välttämätön ydinporokompleksin (NPC) kokoamiselle ja ylläpitämiselle. Ottamalla SNAPf-koodaussekvenssin endogeeniseen lokukseen, fuusioproteiini ilmaistaan natiivin säätelyn alaisena, säilyttäen fysiologiset ilmentymistasot ja subcellulaarisen lokalisoinnin.

SNAPf-tag on SNAP-tagin nopea merkintävariantti, joka on muokattu O6-alkyyliguanidiini-DNA-alkyylitransferaasi, joka reagoi kovalenttisesti bentsyyliguanidiinikonjugoitujen substraattien kanssa. Tämä mahdollistaa Nup133:n erittäin spesifisen ja monipuolisen fluoresoivan merkinnän elävissä tai kiinnitetyissä soluissa käyttämällä soluja läpäiseviä tai läpäisemättömiä SNAP-substraatteja. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-soluissa fuusioproteiini lokalisoituu ydinvaipaan ydinporakomplekseille tyypillisellä pistekuvioisella tavalla. Koska merkintä tapahtuu endogeenisessä lokuksessa, NPC:n stoikiometria ja arkkitehtuuri häiriintyvät vain minimaalisesti, mikä tekee tästä mallista sopivan kvantitatiiviseen superresoluutiomikroskopiaan, yksittäisten molekyylien seurantaan ja NPC:n kokoonpanon ja kierron kineettisiin analyyseihin.

Tämä solulinja tarjoaa vankan alustan ydinkuljetuksen, nukleosytoplasmisen liikenteen dynamiikan, NPC:n biogeneesin interfasi- ja postmitotisen ydinkokoonpanon aikana sekä Y-kompleksin rakenteellisen organisoinnin huokosrakenteessa tutkimiseen. U2OS-tausta tarjoaa tasaisen morfologian ja suuret tumat, mikä helpottaa korkean resoluution kuvantamista. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-solut sopivat erityisen hyvin pulssin ja jäljityksen merkintäkokeisiin, korreloivaan valo- ja elektronimikroskopiaan sekä moniväriseen kuvantamiseen yhdessä muiden endogeenisesti merkittyjen nukleoporiinien tai kuljetustekijöiden kanssa.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa