U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 er en genetisk manipuleret human osteosarkomcellelinje afledt af den oprindelige U2OS-baggrund, hvor det endogene NUP133-lokus er blevet modificeret ved hjælp af CRISPR/Cas9-medieret genomredigering for at kode for et C-terminalt SNAPf-tag. NUP133 er en kernekomponent i Y-komplekset (NUP107-160-komplekset), et strukturelt subkompleks, der er essentielt for samling og vedligeholdelse af nukleare porekomplekser (NPC). Ved at indføre SNAPf-kodningssekvensen in-frame på det endogene locus udtrykkes fusionsproteinet under naturlig regulatorisk kontrol, hvilket bevarer fysiologiske ekspressionsniveauer og subcellulær lokalisering.

SNAPf-tagget er en hurtigt mærkende variant af SNAP-tagget, et konstrueret O6-alkylguanin-DNA-alkyltransferase, der reagerer kovalent med benzylguanin-konjugerede substrater. Dette muliggør en meget specifik og alsidig fluorescerende mærkning af Nup133 i levende eller fiksede celler ved hjælp af cellepermeable eller impermeable SNAP-substrater. I U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-celler lokaliseres fusionsproteinet til kernehinden i et punktformet mønster, der er karakteristisk for kerneporekomplekser. Da mærkningen finder sted på det endogene locus, forstyrres NPC-støkiometrien og -arkitekturen minimalt, hvilket gør denne model velegnet til kvantitativ superopløsningsmikroskopi, sporing af enkeltmolekyler og kinetiske analyser af NPC-samling og -omsætning.

Denne cellelinje udgør en robust platform for studier af nuklear transport, nukleocytoplasmatisk trafikdynamik, NPC-biogenese under interfase og postmitotisk nuklear genopbygning samt strukturel organisering af Y-komplekset inden for porestrukturen. U2OS-baggrunden tilbyder flad morfologi og store kerner, hvilket letter højopløsningsbilleddannelse. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-celler er særligt velegnede til puls-chase-mærkningsforsøg, korrelativ lys- og elektronmikroskopi og flerfarvede billeddannelsesmetoder i kombination med yderligere endogent mærkede nukleoporiner eller transportfaktorer.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring