U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 er en genetisk manipulert human osteosarkomcellelinje avledet fra den opprinnelige U2OS-bakgrunnen, hvor det endogene NUP133-lokuset er modifisert ved hjelp av CRISPR/Cas9-mediert genomredigering for å kode for en C-terminal SNAPf-tag. NUP133 er en kjernekomponent i Y-komplekset (NUP107-160-komplekset), et strukturelt subkompleks som er essensielt for sammensetningen og vedlikeholdet av nukleære porekomplekset (NPC). Ved å introdusere SNAPf-kodingssekvensen i rammen ved det endogene lokuset, uttrykkes fusjonsproteinet under naturlig regulatorisk kontroll, slik at fysiologiske ekspresjonsnivåer og subcellulær lokalisering bevares.

SNAPf-taggen er en hurtigmerkingsvariant av SNAP-taggen, en konstruert O6-alkylguanin-DNA-alkyltransferase som reagerer kovalent med benzylguanin-konjugerte substrater. Dette muliggjør høyspesifikk og allsidig fluorescerende merking av Nup133 i levende eller fiksert celler ved hjelp av cellepermeable eller impermeable SNAP-substrater. I U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-celler lokaliseres fusjonsproteinet til kjernemembranen i et punktformet mønster som er karakteristisk for kjerneporekomplekser. Fordi merking skjer på det endogene lokuset, forstyrres NPC-støkiometrien og -arkitekturen minimalt, noe som gjør denne modellen egnet for kvantitativ superoppløsningsmikroskopi, sporing av enkeltmolekyler og kinetiske analyser av NPC-montering og -omsetning.

Denne cellelinjen gir en robust plattform for å studere nukleær transport, nukleocytoplasmatisk trafikkdynamikk, NPC-biogenese under interfase og postmitotisk nukleær reassembly, og strukturell organisering av Y-komplekset innenfor porestøtten. U2OS-bakgrunnen gir flat morfologi og store kjerner, noe som muliggjør høyoppløselig avbildning. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-celler er spesielt godt egnet for puls-chase-merkingseksperimenter, korrelativ lys- og elektronmikroskopi og flerfarget avbildning i kombinasjon med ytterligere endogent merkede nukleoporiner eller transportfaktorer.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring