U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 adalah garis sel osteosarcoma manusia yang dimodifikasi secara genetik, berasal dari garis sel induk U2OS, di mana lokus NUP133 endogen telah dimodifikasi menggunakan pengeditan genom yang dimediasi oleh CRISPR/Cas9 untuk mengkodekan tag SNAPf pada ujung C-terminal. NUP133 merupakan komponen inti dari kompleks Y (kompleks NUP107-160), subkompleks struktural yang esensial untuk perakitan dan pemeliharaan kompleks pori nukleus (NPC). Dengan memperkenalkan urutan pengkodean SNAPf secara in-frame pada lokus endogen, protein fusi diekspresikan di bawah kendali regulasi alami, menjaga tingkat ekspresi fisiologis dan lokalisasi subseluler.

Tag SNAPf adalah varian penandaan cepat dari tag SNAP, enzim O6-alkilguanin-DNA alkyltransferase yang direkayasa untuk bereaksi kovalen dengan substrat yang dikonjugasi dengan benzylguanin. Hal ini memungkinkan penandaan fluoresen yang sangat spesifik dan serbaguna pada Nup133 di sel hidup atau yang telah difiksasi menggunakan substrat SNAP yang permeabel atau impermeabel. Pada sel U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133, protein fusi terlokalisasi pada selubung nukleus dalam pola bercak yang khas dari kompleks pori nukleus. Karena penandaan terjadi pada lokus endogen, stoikiometri dan arsitektur NPC minimal terganggu, menjadikan model ini cocok untuk mikroskopi super-resolusi kuantitatif, pelacakan molekul tunggal, dan analisis kinetik perakitan dan turnover NPC.

Baris sel ini menyediakan platform yang andal untuk mempelajari transportasi nukleus, dinamika lalu lintas nukleositosolik, biogenesis NPC selama fase interfase dan perakitan ulang nukleus pasca-mitosis, serta organisasi struktural kompleks Y di dalam rangkaian pori. Latar belakang U2OS menawarkan morfologi datar dan nukleus besar, memudahkan pencitraan resolusi tinggi. Sel U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 sangat cocok untuk eksperimen penandaan pulse-chase, mikroskopi cahaya dan elektron korelatif, serta pendekatan pencitraan multicolor bersama dengan nukleoporin atau faktor transportasi yang ditandai secara endogen lainnya.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami