U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 adalah garis sel osteosarcoma manusia yang dimodifikasi genomnya, yang berasal dari sel U2OS, di mana lokus RANBP2 (juga dikenal sebagai NUP358) yang endogen telah dimodifikasi menggunakan CRISPR/Cas9 untuk mengkodekan tag SNAPf yang berada dalam bingkai dengan protein asli. Nup358/RanBP2 adalah nukleoporin besar yang berlokasi pada filamen sitoplasma kompleks pori nukleus (NPC) dan memainkan peran kritis dalam transportasi nukleositoplasma, SUMOylasi, dan proses mitosis. Penandaan endogen memastikan bahwa SNAPf-Nup358 diekspresikan di bawah kendali promotor fisiologis, mempertahankan tingkat ekspresi asli dan meminimalkan artefak yang terkait dengan sistem overexpresi.

Tag SNAPf adalah varian penandaan cepat dari tag SNAP yang secara kovalen mengikat substrat yang dikonjugasi dengan benzylguanine, memungkinkan penandaan fluoresen selektif dan stabil pada Nup358 di sel hidup atau yang telah difiksasi. Pada sel U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, protein fusi ini berlokasi di selubung nukleus dengan distribusi bercak yang khas dari filamen NPC sitoplasmik. Konfigurasi ini mendukung pencitraan fluoresensi beresolusi tinggi, mikroskopi super-resolusi, penandaan pulse-chase, dan pendekatan pelacakan molekul tunggal untuk mempelajari arsitektur dan dinamika NPC. Morfologi datar dan nukleus besar sel U2OS lebih lanjut memudahkan pencitraan kuantitatif struktur selubung nukleus.

Model ini memungkinkan penyelidikan peran spesifik Nup358 dalam ekspor nuklear yang bergantung pada CRM1/exportin, regulasi siklus GTPase Ran, dan organisasi spasial platform transportasi sitoplasma. Mengingat keterlibatan Nup358 dalam perakitan spindel mitosis dan fungsi kinetokor, garis sel ini juga cocok untuk mempelajari redistribusi nukleoporin yang bergantung pada siklus sel dan perakitan/pembongkaran NPC selama mitosis. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 menyediakan platform yang relevan secara fisiologis untuk menganalisis aspek struktural dan fungsional dari sisi sitoplasmik kompleks pori nukleus pada sel manusia.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami