U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

Το U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 είναι μια γενετικά τροποποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος που προέρχεται από κύτταρα U2OS, στα οποία ο ενδογενής τόπος RANBP2 (γνωστός και ως NUP358) έχει τροποποιηθεί με CRISPR/Cas9 για να κωδικοποιεί μια ετικέτα SNAPf σε πλαίσιο με την φυσική πρωτεΐνη. Το Nup358/RanBP2 είναι μια μεγάλη νουκλεοπρωτεΐνη που εντοπίζεται στα κυτταροπλασματικά νημάτια του πυρηνικού πόρου (NPC) και παίζει κρίσιμο ρόλο στη μεταφορά νουκλεοκυτταροπλασματικών, στη SUMOylation και στις μιτωτικές διεργασίες. Η ενδογενής σήμανση εξασφαλίζει ότι το SNAPf-Nup358 εκφράζεται υπό φυσιολογικό έλεγχο προαγωγού, διατηρώντας τα φυσικά επίπεδα έκφρασης και ελαχιστοποιώντας τα τεχνητά φαινόμενα που σχετίζονται με τα συστήματα υπερέκφρασης.

Η ετικέτα SNAPf είναι μια παραλλαγή ταχείας επισήμανσης της ετικέτας SNAP που συνδέεται ομοιοπολικά με υποστρώματα συζευγμένα με βενζυλογουανίνη, επιτρέποντας την επιλεκτική και σταθερή φθορίζουσα επισήμανση της Nup358 σε ζωντανά ή σταθερά κύτταρα. Στα κύτταρα U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, η πρωτεΐνη σύντηξης εντοπίζεται στο πυρηνικό περίβλημα με μια χαρακτηριστική διάταξη σε σημεία που είναι χαρακτηριστική των κυτταροπλασματικών νηματίων NPC. Αυτή η διαμόρφωση υποστηρίζει απεικόνιση φθορισμού υψηλής ανάλυσης, μικροσκοπία υπερ-ανάλυσης, επισήμανση παλμού-κυνηγητού και προσεγγίσεις παρακολούθησης μονομοριακών μορίων για τη μελέτη της αρχιτεκτονικής και της δυναμικής του NPC. Η επίπεδη μορφολογία και οι μεγάλοι πυρήνες των κυττάρων U2OS διευκολύνουν περαιτέρω την ποσοτική απεικόνιση των δομών του πυρηνικού περιβλήματος.

Αυτό το μοντέλο επιτρέπει τη διερεύνηση των ειδικών ρόλων του Nup358 στην εξαρτώμενη από CRM1/εξπορτίνη πυρηνική εξαγωγή, στη ρύθμιση του κύκλου Ran GTPase και στην χωρική οργάνωση των κυτταροπλασματικών πλατφορμών μεταφοράς. Δεδομένης της συμμετοχής του Nup358 στη συναρμολόγηση του μιτωτικού άξονα και στη λειτουργία του κινητοχώρα, η κυτταρική σειρά είναι επίσης κατάλληλη για τη μελέτη της εξαρτώμενης από τον κυτταρικό κύκλο ανακατανομής των νουκλεοπορινών και της αποσυναρμολόγησης/επανασυναρμολόγησης του NPC κατά τη διάρκεια της μίτωσης. Το U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 παρέχει μια φυσιολογικά σχετική πλατφόρμα για την ανάλυση των δομικών και λειτουργικών πτυχών της κυτταροπλασματικής όψης του συμπλέγματος πυρηνικών πόρων σε ανθρώπινα κύτταρα.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης