U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

Το U2OS-CRISPR-TPR-SNAP είναι μια γενετικά τροποποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος που προέρχεται από κύτταρα U2OS, στα οποία το ενδογενές γονίδιο TPR (Translocated Promoter Region) έχει τροποποιηθεί χρησιμοποιώντας την τεχνολογία CRISPR/Cas9 για την κωδικοποίηση μιας ετικέτας SNAP εντός πλαισίου. Το TPR είναι μια μεγάλη νουκλεοπρωτεΐνη με σπειροειδή δομή που εντοπίζεται στο πυρηνικό καλάθι στην πυρηνοπλασματική πλευρά του πυρηνικού πόρου (NPC). Με την επισήμανση του TPR στον ενδογενή του τόπο, η πρωτεΐνη σύντηξης εκφράζεται υπό φυσιολογικό ρυθμιστικό έλεγχο, διατηρώντας τα φυσιολογικά επίπεδα έκφρασης και τη σωστή ενσωμάτωση στη δομή του πυρηνικού καλαθιού.

Η ετικέτα SNAP επιτρέπει την ομοιοπολική επισήμανση του TPR με υποστρώματα φθορισμού συζευγμένα με βενζυλογουανίνη σε ζωντανά ή σταθερά κύτταρα, επιτρέποντας εξαιρετικά συγκεκριμένη και σταθερή οπτικοποίηση. Στα κύτταρα U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, η επισημασμένη TPR εμφανίζει μια χαρακτηριστική διάταξη σε μορφή δακτυλίου στο πυρηνικό περίβλημα, που αντιστοιχεί στις δομές του πυρηνικού καλαθιού που σχετίζονται με το NPC. Αυτό το σύστημα είναι κατάλληλο για ποσοτική φθορισμού μικροσκοπία, απεικόνιση υπερ-ανάλυσης, επισήμανση παλμού-κυνηγητού και δυναμικές μελέτες της συναρμολόγησης και της ανανέωσης του πυρηνικού καλαθιού. Η επίπεδη μορφολογία και οι μεγάλοι πυρήνες των κυττάρων U2OS διευκολύνουν την απεικόνιση υψηλής ανάλυσης των δομών που σχετίζονται με το πυρηνικό περίβλημα.

Το TPR διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην εξαγωγή mRNA, στη ρύθμιση της πυρηνικής μεταφοράς, στην οργάνωση της χρωματίνης στην περιφέρεια του πυρήνα και στην χωρική οργάνωση του γονιδιώματος. Το TPR εμπλέκεται επίσης στη διαμόρφωση υποδιαμερισμάτων που σχετίζονται με την πυρηνική μεταφορά και στον αποκλεισμό της ετεροχρωματίνης από περιοχές που σχετίζονται με τους πυρηνικούς πόρους. Το U2OS-CRISPR-TPR-SNAP παρέχει ένα φυσιολογικά σχετικό μοντέλο για την ανάλυση της αρχιτεκτονικής και της δυναμικής του πυρηνικού καλαθιού, τη διερεύνηση των μηχανισμών πυρηνοκυτταρικής μεταφοράς και τη μελέτη των αλληλεπιδράσεων της χρωματίνης που σχετίζονται με το πυρηνικό περίβλημα υπό ενδογενείς συνθήκες έκφρασης.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης