U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP هو خط خلايا سرطانية عظمية بشرية معدلة جينومياً مشتقة من خلايا U2OS تم تعديل الجين TPR (منطقة المروج المنقولة) فيها باستخدام تقنية CRISPR/Cas9 لترميز علامة SNAP داخل الإطار. TPR هو نوكليوبورين كبير ملفوف يوجد في السلة النووية على الجانب النووي من مجمع المسام النووية (NPC). من خلال وضع علامة على TPR في موقعه الداخلي، يتم التعبير عن البروتين المدمج تحت التحكم التنظيمي الأصلي، مما يحافظ على مستويات التعبير الفسيولوجي ويحافظ على الدمج المناسب في بنية السلة النووية.

تتيح علامة SNAP وضع علامات تساهمية على TPR باستخدام ركائز فلورية مترافقة مع بنزيلجوانين في الخلايا الحية أو الثابتة، مما يتيح تصويرًا عالي الدقة ومستقرًا. في خلايا U2OS-CRISPR-TPR-SNAP، يُظهر TPR المُعلم توزيعًا نقطيًا حلقيًا مميزًا على الغلاف النووي، بما يتوافق مع هياكل السلة النووية المرتبطة بـ NPC. هذا النظام مناسب تمامًا للمجهر الفلوري الكمي، والتصوير فائق الدقة، ووضع العلامات باستخدام تقنية pulse-chase، والدراسات الديناميكية لتجميع السلة النووية وتجددها. تسهل الشكل المسطح والنوى الكبيرة لخلايا U2OS التصوير عالي الدقة للهياكل المرتبطة بالغلاف النووي.

يلعب TPR دورًا مهمًا في تصدير mRNA، وتنظيم النقل النووي، وتنظيم الكروماتين في محيط النواة، وتنظيم الجينوم المكاني. كما يشارك TPR في تكوين المقصورات الفرعية المرتبطة بالنقل النووي وفي استبعاد الهيتيروكروماتين من المناطق المرتبطة بالمسام النووية. يوفر U2OS-CRISPR-TPR-SNAP نموذجًا ذا صلة من الناحية الفسيولوجية لتشريح بنية وديناميكيات السلة النووية، والتحقيق في آليات النقل النووي-السيتوبلازمي، ودراسة تفاعلات الكروماتين المرتبطة بالغلاف النووي في ظل ظروف التعبير الداخلي.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان