U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP es una línea celular de osteosarcoma humano editada genómicamente derivada de células U2OS en la que se ha modificado el gen TPR (región promotora translocada) endógeno mediante la tecnología CRISPR/Cas9 para codificar una etiqueta SNAP en marco. El TPR es una nucleoporina grande en forma de espiral que se localiza en la cesta nuclear en el lado nucleoplásmico del complejo de poros nucleares (NPC). Al etiquetar el TPR en su locus endógeno, la proteína de fusión se expresa bajo control regulador nativo, conservando los niveles de expresión fisiológicos y manteniendo la incorporación adecuada en la estructura de la cesta nuclear.

La etiqueta SNAP permite el marcaje covalente de TPR con sustratos fluorescentes conjugados con bencilguanina en células vivas o fijadas, lo que permite una visualización altamente específica y estable. En las células U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, el TPR marcado muestra una distribución característica en forma de anillo punteado en la envoltura nuclear, que se corresponde con las estructuras de la cesta nuclear asociadas al NPC. Este sistema es muy adecuado para la microscopía de fluorescencia cuantitativa, la obtención de imágenes de superresolución, el marcado por pulso-persecución y los estudios dinámicos del ensamblaje y el recambio de la cesta nuclear. La morfología plana y los núcleos grandes de las células U2OS facilitan la obtención de imágenes de alta resolución de las estructuras asociadas a la envoltura nuclear.

El TPR desempeña un papel fundamental en la exportación del ARNm, la regulación del transporte nuclear, la organización de la cromatina en la periferia nuclear y la organización espacial del genoma. El TPR también interviene en la formación de subcompartimentos relacionados con el transporte nuclear y en la exclusión de la heterocromatina de las regiones asociadas a los poros nucleares. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP proporciona un modelo fisiológicamente relevante para diseccionar la arquitectura y la dinámica de la cesta nuclear, investigar los mecanismos de tráfico nucleocitoplasmático y estudiar las interacciones de la cromatina asociadas a la envoltura nuclear en condiciones de expresión endógena.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía