U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP yra genomo redaguota žmogaus osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš U2OS ląstelių, kuriose endogeninis TPR (Translocated Promoter Region) genas buvo modifikuotas naudojant CRISPR/Cas9 technologiją, kad koduotų in-frame SNAP žymę. TPR yra didelis susuktų spiralės formos nukleoporinas, kuris lokalizuojasi branduolinėje krepšelyje branduolinės poros komplekso (NPC) branduolinės plazmos pusėje. Žymint TPR jo endogeniniame lokuse, jungtinis baltymas yra ekspresuojamas pagal natūralią reguliacinę kontrolę, išsaugant fiziologinius ekspresijos lygius ir išlaikant tinkamą įtraukimą į branduolinės krepšelio struktūrą.

SNAP žymė leidžia kovalentiškai žymėti TPR benzylguano-konjuguotais fluorescenciniais substratais gyvose arba fiksuotose ląstelėse, leidžiant labai specifinį ir stabilų vizualizavimą. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP ląstelėse pažymėtas TPR rodo charakteringą taškinį žiedo formos pasiskirstymą branduolinėje apvalkale, atitinkantį NPC susijusias branduolinio krepšelio struktūras. Ši sistema puikiai tinka kiekybinei fluorescencinei mikroskopijai, super-rezoliucijos vaizdams, impulsų-persekiojimo žymėjimui ir dinamiškiems branduolinio krepšelio surinkimo ir apykaitos tyrimams. Plokščia morfologija ir dideli U2OS ląstelių branduoliai palengvina branduolinės apvalkalo susijusių struktūrų aukštos rezoliucijos vaizdavimą.

TPR atlieka svarbų vaidmenį mRNR eksporte, branduolinio transporto reguliavime, chromatino organizavime branduolinėje periferijoje ir erdvinėje genomo organizavime. TPR taip pat dalyvauja branduolinio transporto susijusių subkompartimentų formavime ir heterochromatino pašalinime iš branduolinės poros susijusių regionų. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP suteikia fiziologiškai reikšmingą modelį branduolinio krepšelio architektūros ir dinamikos analizavimui, branduolinio-citoplazminio transporto mechanizmų tyrimui ir branduolinės apvalkalo susijusių chromatino sąveikų tyrimui endogeninių ekspresijos sąlygomis.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime