U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP es una línea celular de osteosarcoma humano editada genómicamente, derivada de células U2OS, en la que el gen endógeno TPR (región promotora translocada) ha sido modificado mediante la tecnología CRISPR/Cas9 para codificar una etiqueta SNAP en marco de lectura. TPR es una nucleoporina grande de estructura en espiral que se localiza en la cesta nuclear, en el lado nucleoplásmico del complejo de poros nucleares (NPC). Al etiquetar TPR en su locus endógeno, la proteína de fusión se expresa bajo control regulatorio nativo, lo que preserva los niveles de expresión fisiológicos y mantiene la incorporación adecuada a la estructura de la cesta nuclear.

La etiqueta SNAP permite el marcaje covalente de TPR con sustratos fluorescentes conjugados con bencilguanina en células vivas o fijadas, lo que permite una visualización altamente específica y estable. En las células U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, la TPR marcada muestra una distribución característica en forma de anillo punteado en la envoltura nuclear, que corresponde a las estructuras de la cesta nuclear asociadas al NPC. Este sistema es ideal para la microscopía de fluorescencia cuantitativa, la obtención de imágenes de superresolución, el marcaje de pulso-persecución y los estudios dinámicos del ensamblaje y la renovación de la cesta nuclear. La morfología plana y los núcleos grandes de las células U2OS facilitan la obtención de imágenes de alta resolución de las estructuras asociadas a la envoltura nuclear.

La TPR desempeña un papel fundamental en la exportación de ARNm, la regulación del transporte nuclear, la organización de la cromatina en la periferia nuclear y la organización espacial del genoma. La TPR también está implicada en la formación de subcompartimentos relacionados con el transporte nuclear y en la exclusión de la heterocromatina de las regiones asociadas a los poros nucleares. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP ofrece un modelo fisiológicamente relevante para analizar la arquitectura y la dinámica de la canasta nuclear, investigar los mecanismos de tráfico nucleocitoplasmático y estudiar las interacciones de la cromatina asociadas a la envoltura nuclear en condiciones de expresión endógena.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.