U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, endojen TPR (Translocated Promoter Region) geninin CRISPR/Cas9 teknolojisi kullanılarak bir çerçeve içi SNAP etiketi kodlayacak şekilde modifiye edildiği, U2OS hücrelerinden türetilmiş, genomu düzenlenmiş bir insan osteosarkom hücre hattıdır. TPR, nükleer por kompleksinin (NPC) nükleoplazmik tarafındaki nükleer sepete lokalize olan büyük bir sarmal sarmal nükleoporindir. TPR'yi endojen lokusunda etiketleyerek, füzyon proteini doğal düzenleyici kontrol altında eksprese edilir, fizyolojik ekspresyon seviyeleri korunur ve nükleer sepet yapısına uygun şekilde dahil edilmesi sağlanır.

SNAP etiketi, canlı veya sabit hücrelerde TPR'nin benzilguanin konjuge floresan substratlarla kovalent etiketlenmesini sağlayarak, yüksek düzeyde spesifik ve stabil görselleştirme imkanı sunar. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP hücrelerinde, etiketlenmiş TPR, NPC ile ilişkili nükleer sepet yapılarına karşılık gelen, nükleer zarfta karakteristik noktalı halka benzeri bir dağılım gösterir. Bu sistem, kantitatif floresan mikroskopi, süper çözünürlüklü görüntüleme, puls-chase etiketleme ve nükleer sepetin birleşimi ve dönüşümünün dinamik çalışmaları için çok uygundur. U2OS hücrelerinin düz morfolojisi ve büyük çekirdekleri, nükleer zarf ile ilişkili yapıların yüksek çözünürlüklü görüntülemesini kolaylaştırır.

TPR, mRNA ihracatı, nükleer taşıma düzenlemesi, nükleer çevrede kromatin organizasyonu ve uzamsal genom organizasyonunda kritik roller oynar. TPR ayrıca nükleer taşıma ile ilişkili alt bölmelerin oluşumunda ve heterokromatinin nükleer gözenekle ilişkili bölgelerden dışlanmasında da rol oynar. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, nükleer sepetin mimarisini ve dinamiklerini incelemek, nükleositoplazmik taşıma mekanizmalarını araştırmak ve endojen ekspresyon koşulları altında nükleer zarfla ilişkili kromatin etkileşimlerini incelemek için fizyolojik olarak ilgili bir model sağlar.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın