U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, endojen RANBP2 (NUP358 olarak da bilinir) lokusu CRISPR/Cas9 ile modifiye edilerek doğal proteinle aynı çerçeve içinde SNAPf etiketini kodlayan, U2OS hücrelerinden türetilmiş genom düzenlenmiş bir insan osteosarkom hücre hattıdır. Nup358/RanBP2, nükleer por kompleksinin (NPC) sitoplazmik filamentlerinde lokalize olan büyük bir nükleoporindir ve nükleositoplazmik taşıma, SUMOylasyon ve mitotik süreçlerde kritik roller oynar. Endojen etiketleme, SNAPf-Nup358'in fizyolojik promotör kontrolü altında eksprese edilmesini sağlayarak, doğal ekspresyon seviyelerini korur ve aşırı ekspresyon sistemleriyle ilişkili artefaktları en aza indirir.

SNAPf etiketi, benzylguanyin konjuge substratlara kovalent olarak bağlanan SNAP etiketinin hızlı etiketleme varyantıdır ve canlı veya sabit hücrelerde Nup358'in seçici ve stabil floresan etiketlemesini sağlar. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 hücrelerinde, füzyon proteini, sitoplazmik NPC filamentlerinin karakteristik noktalı dağılımında nükleer zarfta lokalize olur. Bu konfigürasyon, NPC mimarisini ve dinamiklerini incelemek için yüksek çözünürlüklü floresan görüntüleme, süper çözünürlüklü mikroskopi, puls-chase etiketleme ve tek molekül izleme yaklaşımlarını destekler. U2OS hücrelerinin düz morfolojisi ve büyük çekirdekleri, nükleer zarf yapılarının kantitatif görüntülemesini daha da kolaylaştırır.

Bu model, CRM1/eksportin bağımlı nükleer ihracat, Ran GTPaz döngüsü düzenlemesi ve sitoplazmik taşıma platformlarının uzamsal organizasyonunda Nup358'e özgü rollerin araştırılmasını mümkün kılar. Nup358'in mitotik iğ montajı ve kinetokor fonksiyonuna katılımı göz önüne alındığında, hücre hattı ayrıca mitoz sırasında nükleoporinlerin hücre döngüsüne bağlı yeniden dağılımını ve NPC'nin sökülmesini/yeniden birleştirilmesini incelemek için de uygundur. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, insan hücrelerinde nükleer gözenek kompleksinin sitoplazmik yüzünün yapısal ve işlevsel yönlerini incelemek için fizyolojik olarak ilgili bir platform sağlar.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın