U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 ir genomā rediģēta cilvēka osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no U2OS šūnām, kurās endogēnais RANBP2 (pazīstams arī kā NUP358) lokuss ir modificēts ar CRISPR/Cas9, lai kodētu SNAPf marķieri in-frame ar dabisko proteīnu. Nup358/RanBP2 ir liels nukleoporīns, kas lokalizēts kodola poru kompleksa (NPC) citoplazmatiskajos filamentos un spēlē svarīgu lomu nukleocitoplazmatiskajā transportā, SUMOilācijā un mitotiskajos procesos. Endogēnā marķēšana nodrošina, ka SNAPf-Nup358 tiek ekspresēts fizioloģiskā promotora kontrolē, saglabājot dabisko ekspresijas līmeni un minimizējot ar pārekspresijas sistēmām saistītos artefaktus.

SNAPf tag ir ātrs marķēšanas variants SNAP-tag, kas kovalenti saistās ar benzilguanīna konjugētiem substrātiem, ļaujot selektīvi un stabili marķēt Nup358 dzīvos vai fiksētos šūnos. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 šūnās fūzijas proteīns lokalizējas kodola apvalkā punktveida izkliedes veidā, kas ir raksturīga citoplazmatiskajiem NPC filamentiem. Šī konfigurācija atbalsta augstas izšķirtspējas fluorescences attēlveidošanu, superizšķirtspējas mikroskopiju, impulsu-pakaļdzīšanas marķēšanu un vienmolekulu izsekošanas pieejas, lai pētītu NPC arhitektūru un dinamiku. U2OS šūnu plakana morfoloģija un lielie kodoli vēl vairāk atvieglo kodola apvalka struktūru kvantitatīvo attēlveidošanu.

Šis modelis ļauj pētīt Nup358 specifiskās lomas CRM1/eksportīna atkarīgajā kodola eksportā, Ran GTPāzes cikla regulācijā un citoplazmatisko transporta platformu telpiskajā organizācijā. Ņemot vērā Nup358 iesaisti mitotiskā vārpstas montāžā un kinetohoras funkcijā, šī šūnu līnija ir piemērota arī šūnu cikla atkarīgās nukleoporīnu pārdales un NPC demontāžas/remontāžas pētīšanai mitozes laikā. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 nodrošina fizioloģiski atbilstošu platformu cilvēka šūnu kodola poru kompleksa citoplazmatiskās virsmas strukturālo un funkcionālo aspektu izpētei.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu