.jpg)
- الأنسجة
- العظام
- المرض
- الساركوما العظمية العظمية
- موقع الانتشار
- موقع الورم الأساسي (العظم)
المستندات
U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2
Cell line · رقم المنتج 300663
U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 is a genome-edited human osteosarcoma cell line derived from U2OS cells in which the endogenous RANBP2 (also known as NUP3...
التخصيص / التوصيات
- U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2Cell line€800.00
موصى بها (أحدث دفعة)
01معلومات عامة
- الوصف
U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 هو خط خلايا سرطانية عظمية بشرية معدلة جينومياً مشتقة من خلايا U2OS حيث تم تعديل موقع RANBP2 (المعروف أيضاً باسم NUP358) الداخلي بواسطة CRISPR/Cas9 لترميز علامة SNAPf في إطار البروتين الأصلي. Nup358/RanBP2 هو نوكليوبورين كبير موجود في خيوط السيتوبلازم لمركب المسام النووية (NPC) ويلعب دورًا مهمًا في النقل النووي-السيتوبلازمي، وSUMOylation، وعمليات الانقسام. يضمن وضع العلامات الداخلية أن SNAPf-Nup358 يتم التعبير عنه تحت سيطرة المروج الفسيولوجي، مما يحافظ على مستويات التعبير الأصلية ويقلل من التشوهات المرتبطة بأنظمة التعبير الزائد.
علامة SNAPf هي متغير سريع التسمية لعلامة SNAP التي ترتبط تساهميًا بركائز مترافقة مع بنزيلجوانين، مما يتيح التسمية الفلورية الانتقائية والمستقرة لـ Nup358 في الخلايا الحية أو الثابتة. في خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2، يتركز البروتين المدمج في الغلاف النووي في توزيع نقطي مميز لخيوط NPC السيتوبلازمية. يدعم هذا التكوين التصوير الفلوري عالي الدقة، والمجهر فائق الدقة، ووضع العلامات بنبضات متتابعة، وأساليب تتبع الجزيء الواحد لدراسة بنية NPC وديناميكياتها. تسهل الشكل المسطح والنوى الكبيرة لخلايا U2OS التصوير الكمي لهياكل الغلاف النووي.
يتيح هذا النموذج دراسة الأدوار الخاصة بـ Nup358 في التصدير النووي المعتمد على CRM1/exportin، وتنظيم دورة Ran GTPase، والتنظيم المكاني لمنصات النقل السيتوبلازمية. نظرًا لمشاركة Nup358 في تجميع المغزل الانقسامي ووظيفة الكينتوكور، فإن خط الخلايا مناسب أيضًا لدراسة إعادة توزيع النوكليوبورينات المعتمدة على دورة الخلية وتفكيك/إعادة تجميع NPC أثناء الانقسام. يوفر U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 منصة ذات صلة فسيولوجية لتشريح الجوانب الهيكلية والوظيفية للوجه السيتوبلازمي لمركب المسام النووية في الخلايا البشرية.
- الأنسجة
- العظام
- المرض
- الساركوما العظمية العظمية
- موقع الانتشار
- موقع الورم الأساسي (العظم)
- التطبيقات
- بيولوجيا الخيوط السيتوبلازمية لمركب المسام النووية؛ دور Nup358/RanBP2 في التصدير النووي بوساطة CRM1؛ دورة Ran GTPase؛ مسار SUMO؛ تجميع المغزل الانقسامي؛ تتبع الجسيمات الفردية؛ الفحص المجهري فائق الدقة؛ التسمية باستخدام تقنية SNAP Pulse-Chase؛ بنية الوجه السيتوبلازمي لمركب المسام النووية
02التصنيف
- كائن حي
- إنسان
- الجنس
- أنثى
- خصائص النمو
- الملتزم
- حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
- GMO-S1
- تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
- GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2) contains a CRISPR-engineered SNAPf-Nup358/RanBP2 fusion enabling precise labeling of nuclear pore cytoplasmic fibrils. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- مستوى السلامة البيولوجية
- 1
03الخصائص
- المورفولوجيا
- شبيه بالظهارة
- نوع الخلية
- الخلايا الظهارية (الساركوما العظمية)
- زمن المضاعفة
- حوالي 24 إلى 36 ساعة
04المعرّفات
- المرجع
- U2OS-CRISPR-SNAPF-Nup358/RanBP2 (كتالوج سيتيون رقم 300663)
- رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
- 9606
- المودع
- مختبر إلينبرغ (EMBL)
05التعبير والقابلية للإصابة
- التعبير البروتيني
- Nup358/RanBP2, SNAPf-tag
06التعامل مع النباتات وزراعتها
- وسط الاستزراع
- مكويز 5 أ، ث: 3.0 جم/لتر جلوكوز، ث: جلوتامين مستقر، ث: 2.0 ملي مولار بيروفات الصوديوم، ث: 2.2 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820200 أ)
- بيئة الحضانة
37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.
- المكملات الغذائية
- أضف إلى الوسط 10٪ FBS، و3.0 جم/لتر جلوكوز، وغلوتامين مستقر، و2.0 ملي مولار من بيروفات الصوديوم، و2.2 جم/لتر NaHCO3، و1٪ NEAA
- كاشف التفكك
- أكوتاس
- إعادة الاستنبات
- قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
- نسبة التقسيم
- من 1 إلى 3
- كثافة البذر
- من 1 إلى 3 × 10⁴ خلية/سم²
- تجديد السوائل
- 2 إلى 3 مرات في الأسبوع
- إذابة الثلج والزراعة
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد
- العقم
يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.
ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.
- وسط التجميد
- كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
- شروط التخزين
للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.
- شروط الشحن
تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.
08المانح
- عمر المتبرع
- 15 سنة
- الأصل العرقي
- قوقازي
09الشؤون القانونية والسلامة
- احتياطات السلامة
- عند التخطيط لتخزين القارورة المبردة في النيتروجين السائل لإذابتها في المستقبل، من الضروري الالتزام بتدابير السلامة الصارمة. من الضروري ارتداء قفازات وملابس واقية مناسبة، كما يلزم استخدام قناع الوجه أو نظارات السلامة أثناء نقل العينات المجمدة من خزان النيتروجين السائل أو إليه. وذلك للتخفيف من خطر الإصابة من الانفجارات المحتملة للنيتروجين المبرد عند الإزالة، والتي يمكن أن تؤدي إلى قذف شظايا حادة.
- الضمان
في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج
للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان
- تسري اتفاقيات الأطراف الثالثة
- نعم
.jpg)
.jpg)
.jpg)
