U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 je génovo upravená ľudská osteosarkómová bunková línia odvodená z buniek U2OS, v ktorej bol endogénny lokus RANBP2 (tiež známy ako NUP358) modifikovaný pomocou CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval SNAPf tag v rámci natívneho proteínu. Nup358/RanBP2 je veľký nukleoporín lokalizovaný v cytoplazmatických filamentoch komplexu jadrových pórov (NPC) a hrá kľúčovú úlohu v nukleocytoplazmatickom transporte, SUMOylácii a mitotických procesoch. Endogénne značkovanie zabezpečuje, že SNAPf-Nup358 je exprimovaný pod fyziologickou kontrolou promotora, čím sa zachovávajú natívne hladiny expresie a minimalizujú sa artefakty spojené so systémami nadmernej expresie.

Značka SNAPf je variantom značky SNAP s rýchlym značením, ktorý kovalentne viaže substráty konjugované s benzylguanínom, čo umožňuje selektívne a stabilné fluorescenčné značenie Nup358 v živých alebo fixovaných bunkách. V bunkách U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 sa fúzny proteín lokalizuje do jadrovej membrány v bodkovitej distribúcii charakteristickej pre cytoplazmatické NPC filamenty. Táto konfigurácia podporuje vysokorozlíšiteľné fluorescenčné zobrazovanie, superrozlíšiteľnú mikroskopiu, pulzno-chase značenie a sledovanie jednotlivých molekúl na štúdium architektúry a dynamiky NPC. Plochá morfológia a veľké jadrá buniek U2OS ďalej uľahčujú kvantitatívne zobrazovanie štruktúr jadrovej membrány.

Tento model umožňuje skúmanie špecifických úloh Nup358 v CRM1/exportín-dependentnom jadrovom exporte, regulácii cyklu Ran GTPázy a priestorovej organizácii cytoplazmatických transportných platforiem. Vzhľadom na účasť Nup358 v mitotickom zoskupovaní vretien a funkcii kinetochóru je táto bunková línia vhodná aj na štúdium redistribúcie nukleoporínov závislej od bunkového cyklu a rozkladu/opätovného zoskupovania NPC počas mitózy. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 poskytuje fyziologicky relevantnú platformu na rozbor štrukturálnych a funkčných aspektov cytoplazmatickej strany komplexu jadrových pórov v ľudských bunkách.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke