U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP je génovo upravená ľudská osteosarkómová bunková línia odvodená z buniek U2OS, v ktorej bol endogénny gén TPR (Translocated Promoter Region) modifikovaný pomocou technológie CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval in-frame SNAP tag. TPR je veľký nukleoporín s vinutou špirálou, ktorý sa lokalizuje do jadrového koša na nukleoplazmatickej strane komplexu jadrových pórov (NPC). Označením TPR na jeho endogénnom mieste sa fúzny proteín exprimuje pod pôvodnou regulačnou kontrolou, čím sa zachovávajú fyziologické hladiny expresie a udržiava sa správne začlenenie do štruktúry jadrového koša.

SNAP tag umožňuje kovalentné značenie TPR fluorescenčnými substrátmi konjugovanými s benzylguanínom v živých alebo fixovaných bunkách, čo umožňuje vysoko špecifickú a stabilnú vizualizáciu. V bunkách U2OS-CRISPR-TPR-SNAP vykazuje značený TPR charakteristické bodkovité prstencové rozloženie na jadrovej membráne, čo zodpovedá štruktúram jadrového koša asociovaných s NPC. Tento systém je vhodný na kvantitatívnu fluorescenčnú mikroskopiu, zobrazovanie s vysokým rozlíšením, pulzno-chase značenie a dynamické štúdie zostavovania a obratu jadrového koša. Plochá morfológia a veľké jadrá buniek U2OS uľahčujú zobrazovanie štruktúr asociovaných s jadrovou membránou s vysokým rozlíšením.

TPR hrá kľúčovú úlohu v exporte mRNA, regulácii jadrového transportu, organizácii chromatínu na okraji jadra a priestorovej organizácii genómu. TPR sa tiež podieľa na tvorbe subkompartmentov súvisiacich s jadrovým transportom a na vylúčení heterochromatínu z oblastí spojených s jadrovými pórmi. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP poskytuje fyziologicky relevantný model na rozbor architektúry a dynamiky jadrového koša, skúmanie mechanizmov nukleocytoplazmatického transportu a štúdium interakcií chromatínu spojených s jadrovou membránou za endogénnych expresných podmienok.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke