U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งกระดูกชนิดโอสติโอซาร์โคมาของมนุษย์ที่ผ่านการแก้ไขจีโนม ซึ่งพัฒนาจากเซลล์ U2OS โดยมีการดัดแปลงยีน TPR (Translocated Promoter Region) ที่มีอยู่เดิมด้วยเทคโนโลยี CRISPR/Cas9 เพื่อให้สามารถเข้ารหัสแท็ก SNAP ที่อยู่ในตำแหน่งที่เหมาะสม TPR เป็นนิวคลีโอโปรินที่มีลักษณะเป็นเกลียวขดขนาดใหญ่ซึ่งตั้งอยู่บริเวณตะกร้านิวเคลียร์ด้านในของโครงสร้างรูพรุนนิวเคลียร์ (NPC) โดยการติดแท็ก TPR ที่ตำแหน่งธรรมชาติของมัน โปรตีนฟิวชันจะถูกแสดงออกภายใต้การควบคุมของระบบควบคุมตามธรรมชาติ ซึ่งช่วยรักษาระดับการแสดงออกทางสรีรวิทยาและคงการรวมตัวเข้ากับโครงสร้างตะกร้านิวเคลียร์ได้อย่างเหมาะสม

แท็ก SNAP ช่วยให้สามารถติดฉลากแบบโควิเลนต์ของ TPR ด้วยสารตั้งต้นเรืองแสงที่เชื่อมต่อกับเบนซิลกัวไนน์ในเซลล์ที่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ถูกตรึงไว้ ทำให้สามารถมองเห็นได้อย่างเฉพาะเจาะจงและคงทน ในเซลล์ U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, TPR ที่ถูกทำเครื่องหมายแสดงการกระจายตัวเป็นวงแหวนลักษณะเฉพาะที่เยื่อหุ้มนิวเคลียส ซึ่งสอดคล้องกับโครงสร้างตะกร้านิวเคลียสที่เกี่ยวข้องกับ NPC ระบบนี้เหมาะสำหรับการศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เชิงปริมาณ การถ่ายภาพความละเอียดสูงพิเศษ การทำเครื่องหมายแบบพัลส์-ไล่ และการศึกษาแบบไดนามิกของการประกอบและการหมุนเวียนของตะกร้านิวเคลียส รูปร่างแบนและนิวเคลียสขนาดใหญ่ของเซลล์ U2OS ช่วยให้สามารถถ่ายภาพโครงสร้างที่เกี่ยวข้องกับเยื่อหุ้มนิวเคลียสด้วยความละเอียดสูงได้

TPR มีบทบาทสำคัญในการส่งออก mRNA การควบคุมการขนส่งในนิวเคลียส การจัดระเบียบโครมาตินบริเวณขอบของนิวเคลียส และการจัดระเบียบจีโนมเชิงพื้นที่ นอกจากนี้ TPR ยังเกี่ยวข้องกับการก่อตัวของซับคอมパートเมนต์ที่เกี่ยวข้องกับการขนส่งในนิวเคลียส และการกีดกันเฮเทอโรโครมาตินออกจากบริเวณที่เกี่ยวข้องกับรูพรุนของนิวเคลียส U2OS-CRISPR-TPR-SNAP เป็นแบบจำลองที่มีความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยาสำหรับการวิเคราะห์โครงสร้างและพลวัตของโครงร่างนิวเคลียร์ การศึกษาการขนส่งระหว่างนิวเคลียสและไซโตพลาซึม และการศึกษาปฏิสัมพันธ์ของโครมาตินที่เกี่ยวข้องกับเยื่อหุ้มนิวเคลียสภายใต้สภาวะการแสดงออกของยีนตามธรรมชาติ

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.