U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งกระดูกชนิด osteosarcoma ของมนุษย์ที่ถูกแก้ไขจีโนม โดยพัฒนาจากเซลล์ U2OS ซึ่งมีการดัดแปลงยีน SEH1L (SEH1) ที่มีอยู่เดิมโดยใช้เทคโนโลยี CRISPR/Cas9 เพื่อให้สามารถเข้ารหัสแท็ก SNAPf ที่อยู่ในตำแหน่งที่เหมาะสม SEH1 เป็นองค์ประกอบหนึ่งของ Y-complex (หรือที่รู้จักในชื่อ NUP107-160 complex) ซึ่งเป็นโมดูลโครงสร้างหลักของนิวเคลียร์พอร์คอมเพล็กซ์ (NPC) ที่มีส่วนช่วยในการประกอบโครงสร้างและเสถียรภาพของโครงร่างของพอร์ ด้วยการแทรกลำดับรหัส SNAPf ที่ตำแหน่งภายในของจีโนม โปรตีน SEH1 ที่ถูกแท็กจะถูกแสดงออกภายใต้การควบคุมของระบบควบคุมตามธรรมชาติ ซึ่งช่วยรักษาระดับการแสดงออกทางสรีรวิทยาและลดการรบกวนต่อองค์ประกอบของนิวเคลียร์พอร์

แท็ก SNAPf เป็นแท็ก SNAP ที่ถูกออกแบบทางวิศวกรรมให้ตอบสนองอย่างรวดเร็ว โดยสามารถจับกับซับสเตรตที่เชื่อมต่อกับเบนซิลกัวไนน์แบบโควาเลนต์ ทำให้สามารถติดฉลากฟลูออเรสเซนต์ได้อย่างเฉพาะเจาะจงและคงที่ในเซลล์ที่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ถูกตรึง ในเซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 โปรตีนฟิวชันจะสะสมอยู่ที่เยื่อหุ้มนิวเคลียสในรูปแบบจุดประ ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของการกระจายตัวของ NPC เนื่องจากการติดฉลากเกิดขึ้นในระดับโปรตีนภายในเซลล์ ระบบนี้จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เชิงปริมาณ การถ่ายภาพความละเอียดสูงพิเศษ และการวิเคราะห์การติดตามอนุภาคเดี่ยวที่มุ่งศึกษาการจัดระเบียบและสัดส่วนของ NPC รูปร่างแบนและนิวเคลียสขนาดใหญ่ของเซลล์ U2OS ยังช่วยอำนวยความสะดวกในการมองเห็นโครงสร้างเยื่อหุ้มนิวเคลียสด้วยความละเอียดสูงอีกด้วย

SEH1 มีส่วนร่วมในการสร้างนิวเคลียร์พอร์ท (NPC) และยังมีส่วนเกี่ยวข้องกับกระบวนการที่เกี่ยวข้องกับคีเนโทโคร (kinetochore) ในระหว่างการแบ่งเซลล์แบบไมโทซิส (mitosis) ดังนั้น สายเซลล์นี้จึงเป็นแพลตฟอร์มที่แข็งแกร่งสำหรับการศึกษาการประกอบและแยกตัวของ NPC ที่ขึ้นกับวัฏจักรเซลล์ การจัดระเบียบเชิงพื้นที่ของคอมเพล็กซ์ Y ภายในโครงสร้างรองรับของนิวเคลียร์พอร์ท และบทบาทสองด้านที่อาจเกิดขึ้นของ SEH1 ที่เยื่อหุ้มนิวเคลียสและคีเนโทโครในระหว่างการแบ่งเซลล์แบบไมโทซิส U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ช่วยให้สามารถศึกษาเชิงกลไกของโครงสร้างและพลวัตของรูพรุนนิวเคลียสภายใต้สภาวะการแสดงออกที่เกี่ยวข้องทางสรีรวิทยา

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.