U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 è una linea cellulare di osteosarcoma umano modificata geneticamente derivata dalle cellule U2OS, in cui il gene endogeno SEH1L (SEH1) è stato modificato utilizzando la tecnologia CRISPR/Cas9 per codificare un tag SNAPf in-frame. SEH1 è un componente del complesso Y (noto anche come complesso NUP107-160), un modulo strutturale centrale del complesso dei pori nucleari (NPC) che contribuisce all'assemblaggio e alla stabilità dell'impalcatura dei pori. Inserendo la sequenza codificante SNAPf nel locus endogeno, la proteina SEH1 marcata viene espressa sotto il controllo regolatorio nativo, preservando i livelli di espressione fisiologica e riducendo al minimo le perturbazioni della composizione dei pori nucleari.

Il tag SNAPf è una variante ingegnerizzata e a reazione rapida del tag SNAP che si lega in modo covalente ai substrati coniugati con benzilguanina, consentendo una marcatura fluorescente selettiva e stabile in cellule vive o fissate. Nelle cellule U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, la proteina di fusione si localizza nell'involucro nucleare con un pattern puntiforme caratteristico della distribuzione NPC. Poiché l'etichettatura avviene a livelli proteici endogeni, questo sistema è particolarmente adatto per la microscopia a fluorescenza quantitativa, l'imaging a super risoluzione e le analisi di tracciamento di singole particelle volte a sezionare l'organizzazione e la stechiometria degli NPC. La morfologia piatta e i nuclei di grandi dimensioni delle cellule U2OS facilitano ulteriormente la visualizzazione ad alta risoluzione delle strutture dell'involucro nucleare.

SEH1 partecipa alla biogenesi NPC ed è stato anche implicato nei processi associati al cinetocoro durante la mitosi. Di conseguenza, questa linea cellulare fornisce una solida piattaforma per lo studio dell'assemblaggio e del disassemblaggio NPC dipendente dal ciclo cellulare, dell'organizzazione spaziale del complesso Y all'interno dello scaffold dei pori e dei potenziali ruoli duali di SEH1 nell'involucro nucleare e nei cinetocori mitotici. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 consente studi meccanicistici dell'architettura e della dinamica dei pori nucleari in condizioni di espressione fisiologicamente rilevanti.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia