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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107
Tessuto
Osso
Malattia
Osteosarcoma

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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107

Cell line · Codice prodotto 300294

La linea cellulare U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 rappresenta una variante specializzata della linea cellulare U-2 OS, ampiamente utilizzata, derivata dall'osteosarcoma umano. Questo particolare modello è stato...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 rappresenta una variante specializzata della linea cellulare di osteosarcoma umano U-2 OS, ampiamente utilizzata. Questo particolare modello è stato ingegnerizzato per esprimere la versione SNAP-tagged della nucleoporina Nup107, un componente fondamentale del complesso del poro nucleare, essenziale per il trasporto di molecole tra il nucleo e il citoplasma. L'integrazione della tecnologia SNAP-tag consente l'etichettatura e la visualizzazione biorigonale di Nup107 in cellule vive o fissate, fornendo un potente strumento per studiare il trasporto nucleocitoplasmatico e l'architettura del complesso del poro nucleare in condizioni fisiologiche.

Il background U-2 OS offre diversi vantaggi, tra cui tassi di crescita robusti e un cariotipo ben caratterizzato, che supportano applicazioni di screening ad alto rendimento e studi genomici. La tecnologia ZFN (Zinc Finger Nuclease) utilizzata in questa linea cellulare facilita l'editing mirato del genoma, migliorando la precisione con cui i ricercatori possono studiare i contributi genetici al trasporto nucleare e ad altri processi cellulari. Questa linea cellulare è particolarmente utile per gli studi volti a chiarire la dinamica e la regolazione dei complessi dei pori nucleari nella biologia del cancro e nella fisiologia cellulare.

Grazie alla natura specializzata della linea cellulare U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294, è molto adatta a tecniche di imaging avanzate, tra cui la microscopia a super-risoluzione, per esplorare le funzioni delle nucleoporine con un dettaglio senza precedenti. È inoltre una risorsa preziosa per lo sviluppo di strategie terapeutiche mirate alle vie di trasporto nucleare implicate in varie malattie, tra cui il cancro. La componente SNAP-tag aggiunge versatilità per ulteriori analisi biochimiche e proteomiche, rendendolo uno strumento indispensabile nel campo della biologia cellulare e molecolare.

Tessuto
Osso
Malattia
Osteosarcoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294) contains a ZFN-mediated SNAP-Nup107 gene fusion, supporting selective labeling of the Nup107 nuclear pore subunit. The modification is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 (numero di catalogo Cytion 300294)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FM
Depositario
Il laboratorio Ellenberg (EMBL)

04Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
SNAP-Nup107 (proteina 107 del complesso del poro nucleare, SNAP-tag)

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosio, w: Glutammina stabile, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820200a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 3,0 g/L di glucosio, Glutammina stabile, 2,0 mM di piruvato di sodio, 2,2 g/L di NaHCO3, 1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
15 anni
Etnia
Caucasico