U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP è una linea cellulare di osteosarcoma umano modificata genomicamente derivata dalle cellule U2OS in cui il gene TPR (Translocated Promoter Region) endogeno è stato modificato utilizzando la tecnologia CRISPR/Cas9 per codificare un tag SNAP in-frame. Il TPR è una grande nucleoporina a spirale che si localizza nel basket nucleare sul lato nucleoplasmatico del complesso dei pori nucleari (NPC). Contrassegnando il TPR nel suo locus endogeno, la proteina di fusione viene espressa sotto il controllo regolatorio nativo, preservando i livelli di espressione fisiologica e mantenendo il corretto inserimento nella struttura del basket nucleare.

Il tag SNAP consente la marcatura covalente di TPR con substrati fluorescenti coniugati con benzilguanina in cellule vive o fissate, consentendo una visualizzazione altamente specifica e stabile. Nelle cellule U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, il TPR marcato mostra una caratteristica distribuzione puntiforme ad anello sull'involucro nucleare, corrispondente alle strutture del nucleo associate all'NPC. Questo sistema è particolarmente adatto per la microscopia a fluorescenza quantitativa, l'imaging a super risoluzione, la marcatura pulse-chase e gli studi dinamici sull'assemblaggio e il ricambio del nucleo. La morfologia piatta e i nuclei di grandi dimensioni delle cellule U2OS facilitano l'imaging ad alta risoluzione delle strutture associate all'involucro nucleare.

Il TPR svolge un ruolo fondamentale nell'esportazione dell'mRNA, nella regolazione del trasporto nucleare, nell'organizzazione della cromatina alla periferia nucleare e nell'organizzazione spaziale del genoma. Il TPR è anche implicato nella formazione di sottocompartimenti legati al trasporto nucleare e nell'esclusione dell'eterocromatina dalle regioni associate ai pori nucleari. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP fornisce un modello fisiologicamente rilevante per analizzare l'architettura e la dinamica del basket nucleare, studiare i meccanismi di traffico nucleocitoplasmatico e studiare le interazioni della cromatina associate all'involucro nucleare in condizioni di espressione endogena.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia