U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP הוא קו תאים של אוסטאוסרקומה אנושית שעבר עריכת גנום, שמקורו בתאי U2OS, בהם הגן האנדוגני TPR (Translocated Promoter Region) שונה באמצעות טכנולוגיית CRISPR/Cas9 כדי לקודד תגית SNAP בתוך המסגרת. TPR הוא נוקליופורין גדול בעל מבנה סליל כפול, הממוקם בסל הגרעיני בצד הגרעיני של קומפלקס הנקבוביות הגרעיניות (NPC). על ידי תיוג TPR בלוקוס האנדוגני שלו, החלבון הממוזג מבוטא תחת בקרה רגולטורית טבעית, תוך שמירה על רמות ביטוי פיזיולוגיות ושילוב תקין במבנה הסל הגרעיני.

תג SNAP מאפשר תיוג קוולנטי של TPR עם מצעים פלואורסצנטיים מצומדים לבנזילגואנין בתאים חיים או קבועים, מה שמאפשר הדמיה ספציפית ויציבה ביותר. בתאי U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, TPR המסומן מציג התפלגות אופיינית של טבעות נקודתיות במעטפת הגרעין, התואמת למבנים של סל גרעיני הקשורים ל-NPC. מערכת זו מתאימה היטב למיקרוסקופיה פלואורסצנטית כמותית, הדמיה ברזולוציה גבוהה, תיוג פולס-צ'ייס ומחקרים דינמיים של הרכבת סל גרעיני ותחלופתו. המורפולוגיה השטוחה והגרעינים הגדולים של תאי U2OS מקלים על הדמיה ברזולוציה גבוהה של מבנים הקשורים למעטפת הגרעין.

TPR ממלא תפקידים קריטיים בייצוא mRNA, בוויסות הובלה גרעינית, בארגון כרומטין בפריפריה הגרעינית ובארגון גנומי מרחבי. TPR מעורב גם ביצירת תת-תאים הקשורים להובלה גרעינית ובהדרת הטרוכרומטין מאזורים הקשורים לנקבוביות גרעיניות. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP מספק מודל פיזיולוגי רלוונטי לניתוח הארכיטקטורה והדינמיקה של הסל הגרעיני, לחקר מנגנוני התעבורה הגרעינית-ציטופלזמית ולחקר האינטראקציות בין הכרומטין הקשור למעטפת הגרעין בתנאי ביטוי אנדוגניים.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו