U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP est une lignée cellulaire d’ostéosarcome humain modifiée génomiquement, dérivée de cellules U2OS, dans laquelle le gène endogène TPR (région promotrice translocée) a été modifié à l’aide de la technologie CRISPR/Cas9 afin de coder pour un marqueur SNAP en cadre de lecture. La TPR est une grande nucléoporine à structure en hélice enroulée qui se localise dans le panier nucléaire, du côté nucléoplasmique du complexe des pores nucléaires (NPC). En marquant la TPR à son locus endogène, la protéine de fusion est exprimée sous le contrôle régulateur natif, ce qui préserve les niveaux d’expression physiologiques et assure son intégration adéquate dans la structure du panier nucléaire.

Le marqueur SNAP permet le marquage covalent de la TPR avec des substrats fluorescents conjugués à la benzylguanine dans des cellules vivantes ou fixées, ce qui permet une visualisation hautement spécifique et stable. Dans les cellules U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, la protéine TPR marquée présente une distribution ponctuelle caractéristique en forme d’anneau au niveau de l’enveloppe nucléaire, correspondant aux structures du panier nucléaire associées au NPC. Ce système est particulièrement adapté à la microscopie à fluorescence quantitative, à l’imagerie à super-résolution, au marquage par impulsion-poursuite et aux études dynamiques de l’assemblage et du renouvellement du panier nucléaire. La morphologie aplatie et les gros noyaux des cellules U2OS facilitent l’imagerie à haute résolution des structures associées à l’enveloppe nucléaire.

La protéine TPR joue un rôle essentiel dans l’exportation de l’ARNm, la régulation du transport nucléaire, l’organisation de la chromatine à la périphérie du noyau et l’organisation spatiale du génome. Elle est également impliquée dans la formation de sous-compartiments liés au transport nucléaire et dans l’exclusion de l’hétérochromatine des régions associées aux pores nucléaires. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP offre un modèle physiologiquement pertinent pour analyser l’architecture et la dynamique du panier nucléaire, étudier les mécanismes de trafic nucléocytoplasmique et examiner les interactions entre la chromatine et l’enveloppe nucléaire dans des conditions d’expression endogènes.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.