U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP je genomsko spremenjena človeška osteosarkomska celična linija, pridobljena iz celic U2OS, v kateri je bil endogeni gen TPR (Translocated Promoter Region) spremenjen s tehnologijo CRISPR/Cas9, da kodira SNAP-oznako v okviru. TPR je velik nukleoporin v obliki navite spirale, ki se nahaja v jedrski košarici na nukleoplazemski strani jedrskega por kompleksa (NPC). Z označevanjem TPR na njegovem endogenem lokusu se fuzijski protein izraža pod naravnim regulativnim nadzorom, ohranja fiziološke ravni izražanja in vzdržuje ustrezno vključevanje v strukturo jedrske košarice.

Oznaka SNAP omogoča kovalentno označevanje TPR z benzilguaninom konjugiranimi fluorescenčnimi substrati v živih ali fiksiranih celicah, kar omogoča visoko specifično in stabilno vizualizacijo. V celicah U2OS-CRISPR-TPR-SNAP označeni TPR kaže značilno pikasto obročasto porazdelitev na jedrski ovojnici, ki ustreza strukturam jedrskega košarice, povezanim z NPC. Ta sistem je primeren za kvantitativno fluorescenčno mikroskopijo, slikanje z visoko ločljivostjo, označevanje s pulzno-zasledovanjem in dinamične študije sestavljanja in obnove jedrske košarice. Ploščata morfologija in velika jedra celic U2OS omogočajo slikanje struktur, povezanih z jedrsko ovojnico, z visoko ločljivostjo.

TPR ima ključno vlogo pri izvozu mRNA, regulaciji jedrskega transporta, organizaciji kromatina na jedrskem obrobju in prostorski organizaciji genoma. TPR je vpleten tudi v nastajanje podkompartmentov, povezanih z jedrskim transportom, in v izključevanje heterokromatina iz regij, povezanih z jedrskimi porami. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP zagotavlja fiziološko relevanten model za razčlenitev arhitekture in dinamike jedrske košarice, preučevanje mehanizmov jedrsko-citoplazmatskega prometa in študij interakcij kromatina, povezanih z jedrsko ovojnico, v endogenih izraževalnih pogojih.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo