U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAPは、U2OS細胞を起源とするゲノム編集ヒト骨肉腫細胞株であり、内因性TPR（転座プロモーター領域）遺伝子がCRISPR/Cas9技術を用いて改変され、フレーム内SNAPタグをコードするようにされている。 TPRは核膜孔複合体（NPC）の核質側にある核小胞体に局在する大型のコイルドコイル構造を持つヌクレオポリンである。TPRの内因性遺伝子座にタグを付加することで、融合タンパク質は生来の調節機構下で発現し、生理的発現レベルを維持するとともに核小胞体構造への適切な組み込みを保持する。

SNAPタグにより、生細胞または固定細胞においてベンジルグアニン結合型蛍光基質を用いたTPRの共有結合的標識が可能となり、高特異的かつ安定した可視化を実現する。 U2OS-CRISPR-TPR-SNAP細胞において、標識されたTPRは核膜上で特徴的な点状リング様分布を示し、これはNPC関連核バスケット構造に対応する。本システムは、定量的蛍光顕微鏡観察、超解像イメージング、パルスチェイス標識法、ならびに核バスケットの組立・分解動態研究に極めて適している。U2OS細胞の平坦な形態と大型核は、核膜関連構造の高解像度イメージングを容易にする。

TPRはmRNA輸出、核輸送調節、核周辺部のクロマチン組織化、空間的ゲノム組織化において重要な役割を果たす。また核輸送関連サブコンパートメントの形成や、核膜孔関連領域からのヘテロクロマチン排除にも関与している。 U2OS-CRISPR-TPR-SNAPは、核小胞体の構造と動態の解明、核細胞質間輸送機構の調査、および内因性発現条件下での核膜関連クロマチン相互作用の研究を行うための、生理学的に関連性の高いモデルを提供する。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。