U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP — це генетично модифікована лінія клітин остеосаркоми людини, отримана з клітин U2OS, в яких ендогенний ген TPR (Translocated Promoter Region) був модифікований за допомогою технології CRISPR/Cas9 для кодування SNAP-мітки в рамці зчитування. TPR — це великий спіральний нуклеопорин, який локалізується в ядерному кошику на нуклеоплазматичній стороні ядерного пористого комплексу (NPC). Завдяки мітці TPR в його ендогенному локусі, фузійний білок експресується під нативним регуляторним контролем, зберігаючи фізіологічні рівні експресії та підтримуючи належне включення в структуру ядерного кошика.

SNAP-тег дозволяє ковалентно маркувати TPR бензилгуанін-кон'югованими флуоресцентними субстратами в живих або фіксованих клітинах, забезпечуючи високу специфічність і стабільність візуалізації. У клітинах U2OS-CRISPR-TPR-SNAP мічений TPR демонструє характерний точковий кільцеподібний розподіл на ядерній оболонці, що відповідає структурам ядерного кошика, пов'язаних з NPC. Ця система добре підходить для кількісної флуоресцентної мікроскопії, зображення з надвисокою роздільною здатністю, мічення методом імпульсного переслідування та динамічних досліджень складання та обороту ядерного кошика. Плоска морфологія та великі ядра клітин U2OS сприяють зображенню структур, пов'язаних з ядерною оболонкою, з високою роздільною здатністю.

TPR відіграє важливу роль в експорті мРНК, регуляції ядерного транспорту, організації хроматину на периферії ядра та просторовій організації геному. TPR також бере участь у формуванні субкомпартаментів, пов'язаних з ядерним транспортом, та у виключенні гетерохроматину з областей, пов'язаних з ядерними порами. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP забезпечує фізіологічно релевантну модель для аналізу архітектури та динаміки ядерного кошика, дослідження механізмів ядерно-цитоплазматичного транспорту та вивчення взаємодій хроматину, пов'язаних з ядерною оболонкою, в умовах ендогенної експресії.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>