Перейти до вмісту
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Тканина
Кость
Хвороба
Остеосаркома

Документи

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Номер товару 300448

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo — це генетично модифікована клітинна лінія, отримана з клітин U-2 OS людської остеосаркоми. Ця клітинна лінія була модифікована за допомогою...

€800.00без урахування податків та вартості доставки
Є в наявності
Лот
Рекомендовано (найсвіжіша партія)
  • CoA
1

01Загальна інформація

Опис

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo - це генно-інженерна клітинна лінія, отримана з клітин остеосаркоми людини U-2 OS. Цю клітинну лінію було модифіковано за допомогою технології CRISPR-Cas9 для включення HaloTag в локус гена NUP96. NUP96, що входить до складу комплексу ядерних пор, відіграє важливу роль у ядерному транспорті та клітинній регуляції. Введення HaloTag дозволяє точно візуалізувати та біохімічно характеризувати динаміку та взаємодію NUP96 в клітині.

Полегшуючи ковалентне приєднання флуоресцентних лігандів або інших зондів, HaloTag дозволяє проводити візуалізацію в режимі реального часу і є потужним інструментом для вивчення механізмів ядерного транспорту в живих клітинах. Цей конкретний клон, номер 252, був обраний за його стабільну експресію HaloTagged NUP96, що забезпечує стабільну продуктивність в експериментальних установках. Ця особливість робить його дуже придатним для методів візуалізації з високою роздільною здатністю та вивчення молекулярних взаємодій, тим самим підтримуючи передові дослідження в галузі клітинної біології, зокрема, в контексті ядерної функції та генетичної регуляції.

Тканина
Кость
Хвороба
Остеосаркома

02Класифікація

Організм
Людина
Секс
Жінка
Характеристики росту
Прихильник
Статус ГМО
GMO-S1
Детальна інформація щодо статусу ГМО
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Епітеліальноподібні

04Ідентифікатори

Посилання
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (номер за каталогом Cytion 300448)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
9606
Целозавр
CVCL_B7FI
Вкладник
Лабораторія Елленберга (EMBL)

05Експресія та сприйнятливість

Експресія білків
NUP96-Halo (ендогенний білок комплексу ядерних пор 96, мічений Halo)

06Обробка та вирощування

Живильне середовище
McCoys 5a, w: 3,0 г/л Глюкоза, w: стабільна Глютамін, w: 2,0 мМ Піруват натрію, w: 2,2 г/л NaHCO3 (Cytion article number 820200a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS
Реагент для дисоціації
Аккутаза
Пересадка в нове середовище
Видаліть старе середовище з прилиплих клітин і промийте їх PBS, в якому бракує кальцію і магнію. Для колб T25 використовуйте 3-5 мл PBS, а для колб T75 - 5-10 мл. Потім повністю покрийте клітини аккутазою, використовуючи 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75. Залиште клітини інкубуватися при кімнатній температурі протягом 8-10 хвилин, щоб відокремити їх. Після інкубації обережно змішайте клітини з 10 мл середовища, щоб ресуспендувати їх, а потім центрифугуйте при 300xg протягом 3 хвилин. Викиньте надосадову рідину, ресуспендуйте клітини у свіжому середовищі та перенесіть їх у нові колби, які вже містять свіже середовище.
Щільність висіву
1 x 104 клітин/см2
Оновлення рідини
2-3 рази на тиждень
Розморожування та культивування
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контроль якості та кріоконсервація

Стерильність

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Середовище для заморожування
Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

08Донор

Вік донора
15 років
Етнічна приналежність
Кавказець

Вам також може знадобитися