Pāriet uz saturu
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Audums
Bone
Slimība
Osteosarkoma

Dokumenti

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Preces numurs 300448

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo ir ģenētiski modificēta šūnu līnija, kas iegūta no cilvēka osteosarkomas U-2 OS šūnām. Šī šūnu līnija ir modificēta, izmantojot...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo ir ģenētiski modificēta šūnu līnija, kas iegūta no cilvēka osteosarkomas U-2 OS šūnām. Šī šūnu līnija ir modificēta, izmantojot CRISPR-Cas9 tehnoloģiju, lai NUP96 gēna lokusā iekļautu HaloTag. NUP96, kas ir daļa no kodola poru kompleksa, ir būtiska loma kodola transportēšanā un šūnu regulēšanā. HaloTag ieviešana ļauj precīzi vizualizēt un bioķīmiski raksturot NUP96 dinamiku un mijiedarbību šūnā.

Atvieglojot fluorescējošu ligandu vai citu zondju kovalentu piestiprināšanu, HaloTag ļauj veikt attēlošanu reāllaikā un nodrošina spēcīgu instrumentu kodola transporta mehānismu izpētei dzīvās šūnās. Šis konkrētais klons ar 252. numuru ir izvēlēts, lai nodrošinātu stabilu NUP96 ar HaloTag tagu ekspresiju, kas nodrošina nemainīgu veiktspēju eksperimentālajās iekārtās. Šī īpašība padara to ļoti piemērotu augstas izšķirtspējas attēlveidošanas metodēm un molekulārās mijiedarbības pētījumiem, tādējādi atbalstot progresīvus pētījumus šūnu bioloģijā, jo īpaši saistībā ar kodola funkciju un ģenētisko regulāciju.

Audums
Bone
Slimība
Osteosarkoma

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs

04Identifikatori

Atsauce
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (Cytion kataloga numurs 300448)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
NUP96-Halo (endogēnais kodola poru kompleksa proteīns 96, marķēts ar Halo)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glikoze, w: stabils glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820200a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
15 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis