U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ir genomā rediģēta cilvēka osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no U2OS šūnām, kurās endogēnais SEH1L (SEH1) gēns ir modificēts, izmantojot CRISPR/Cas9 tehnoloģiju, lai kodētu in-frame SNAPf tagu. SEH1 ir Y-kompleksa (pazīstams arī kā NUP107-160 komplekss) komponents, kas ir kodola poru kompleksa (NPC) galvenais strukturālais modulis, kas veicina poru skeleta montāžu un stabilitāti. Ievietojot SNAPf kodējošo sekvenci endogēnajā lokusā, marķētā SEH1 proteīna ekspresija notiek saskaņā ar dabisko regulējošo kontroli, saglabājot fizioloģiskos ekspresijas līmeņus un minimizējot traucējumus kodola poru sastāvā.

SNAPf marķieris ir inženierijas izstrādāts, ātri reaģējošs SNAP marķiera variants, kas kovalenti saistās ar benzilguanīna konjugētiem substrātiem, ļaujot selektīvi un stabili marķēt dzīvas vai fiksētas šūnas. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 šūnās fūzijas proteīns lokalizējas kodola apvalkā punktveida modelī, kas ir raksturīgs NPC izplatībai. Tā kā marķēšana notiek endogēno proteīnu līmenī, šī sistēma ir labi piemērota kvantitatīvai fluorescences mikroskopijai, superizšķirtspējas attēlveidošanai un vienu daļiņu izsekošanas analīzēm, kuru mērķis ir izpētīt NPC organizāciju un stehiometriju. U2OS šūnu plakana morfoloģija un lielie kodoli vēl vairāk atvieglo kodola apvalka struktūru vizualizāciju augstā izšķirtspējā.

SEH1 piedalās NPC biogēnēzē un ir iesaistīts arī kinetohoru saistītajos procesos mitozes laikā. Tādējādi šī šūnu līnija nodrošina stabilu platformu, lai pētītu šūnu cikla atkarīgo NPC montāžu un demontāžu, Y kompleksa telpisko organizāciju poru skeleta ietvaros un SEH1 potenciālo dubulto lomu kodola apvalkā un mitotiskajos kinetohoros. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ļauj veikt mehāniskos pētījumus par kodola poru arhitektūru un dinamiku fizioloģiski atbilstošos ekspresijas apstākļos.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu