U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 es una línea celular de osteosarcoma humano editada genómicamente derivada de células U2OS en la que se ha modificado el gen SEH1L (SEH1) endógeno mediante la tecnología CRISPR/Cas9 para codificar una etiqueta SNAPf en marco. SEH1 es un componente del complejo Y (también conocido como complejo NUP107-160), un módulo estructural central del complejo de poros nucleares (NPC) que contribuye al ensamblaje y la estabilidad del andamio de los poros. Al insertar la secuencia codificante SNAPf en el locus endógeno, la proteína SEH1 etiquetada se expresa bajo control regulador nativo, lo que preserva los niveles de expresión fisiológicos y minimiza las perturbaciones en la composición de los poros nucleares.

La etiqueta SNAPf es una variante modificada genéticamente y de rápida reacción de la etiqueta SNAP que se une covalentemente a sustratos conjugados con bencilguanina, lo que permite un marcaje fluorescente selectivo y estable en células vivas o fijadas. En las células U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, la proteína de fusión se localiza en la envoltura nuclear con un patrón punteado característico de la distribución del NPC. Dado que el marcaje se produce a niveles de proteína endógena, este sistema es muy adecuado para la microscopía de fluorescencia cuantitativa, la obtención de imágenes de superresolución y los análisis de seguimiento de partículas individuales destinados a diseccionar la organización y la estequiometría de los NPC. La morfología plana y los núcleos grandes de las células U2OS facilitan aún más la visualización de alta resolución de las estructuras de la envoltura nuclear.

SEH1 participa en la biogénesis de los NPC y también se ha implicado en procesos asociados al cinetocoro durante la mitosis. En consecuencia, esta línea celular proporciona una plataforma sólida para investigar el ensamblaje y desensamblaje de los NPC dependiente del ciclo celular, la organización espacial del complejo Y dentro del andamio del poro y las posibles funciones duales de SEH1 en la envoltura nuclear y los cinetocoros mitóticos. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 permite realizar estudios mecánicos de la arquitectura y la dinámica de los poros nucleares en condiciones de expresión fisiológicamente relevantes.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía